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微生物酵素对慢加急亚急性肝衰竭大鼠模型及病人肠粘膜保护作用研究

摘要

慢加急亚急性肝衰竭（ACLF）发病进程中，肠粘膜屏障功能受损引发的肠源性感染是加重病情的关键因素。本研究通过建立ACLF大鼠模型，结合临床病人对照试验，探究微生物酵素对肠粘膜的保护作用及机制。结果显示，微生物酵素可显著提升ACLF大鼠肠粘膜紧密连接蛋白（Occludin、ZO-1）表达水平，降低肠粘膜通透性，减少血清内毒素（LPS）及炎症因子（TNF-α、IL-6）含量；临床研究中，干预组病人肠粘膜损伤修复速度加快，感染发生率较对照组降低32.7%。表明微生物酵素可通过增强肠粘膜屏障功能、抑制炎症反应，为ACLF的辅助治疗提供新方向。

1引言

ACLF是由慢性肝病基础上急性诱因引发的严重肝功能失代偿综合征，病死率高达50%-70%。近年研究证实，肠-肝轴紊乱是ACLF病情进展的核心环节：肝功能受损导致肠道动力减弱、胆汁酸分泌减少，肠道菌群失衡引发致病菌过度繁殖，肠粘膜屏障破坏后，内毒素、细菌易位进入体循环，激活全身炎症反应，形成“肝损伤-肠屏障破坏-炎症加重”的恶性循环[1]。

目前临床针对ACLF肠粘膜损伤的干预手段有限，益生菌、益生元等微生态制剂虽能调节菌群，但对已受损肠粘膜的修复作用较弱。微生物酵素作为经特定微生物发酵产生的复合生物活性物质，含多糖、有机酸、酶类等成分，已在胃肠道疾病中展现出粘膜修复潜力[2]。本研究首次同步在ACLF大鼠模型与临床病人中，验证微生物酵素对肠粘膜的保护作用，为其临床应用提供实验依据。

2材料与方法

2.1实验材料

微生物酵素：选用某品牌复合微生物酵素（主要菌种：乳酸菌、酵母菌、枯草芽孢杆菌，活性成分：蛋白酶≥150U/g、超氧化物歧化酶≥80U/g）；

实验动物：SPF级SD大鼠60只，雄性，体重220-250g，购自某实验动物中心；

临床病例：选取2024年1月-2024年6月某医院ACLF患者80例，符合《肝衰竭诊疗指南（2022年版）》诊断标准，排除肠道肿瘤、肠结核等疾病。

2.2实验设计

2.2.1大鼠模型实验

模型建立：采用“四氯化碳（CCl?）腹腔注射+高脂饲料喂养”构建ACLF大鼠模型：每周2次腹腔注射40%CCl?橄榄油溶液（0.3ml/100g），持续8周建立慢性肝损伤，第9周单次注射D-氨基半乳糖（D-GalN，800mg/kg）诱导急性发作；

分组干预：将60只大鼠随机分为3组（n=20）：

正常对照组：常规饲料喂养，无干预；

ACLF模型组：模型建立后，每日灌胃生理盐水10ml/kg；

酵素干预组：模型建立后，每日灌胃微生物酵素溶液10ml/kg（浓度100mg/ml）；

检测指标：干预14天后，检测大鼠肠粘膜组织病理学（HE染色）、紧密连接蛋白表达（WesternBlot）、血清LPS（鲎试剂法）及炎症因子（ELISA法）。

2.2.2临床病人研究

分组方案：80例患者随机分为对照组（n=40）与干预组（n=40）：

对照组：给予ACLF常规治疗（保肝、抗病毒、营养支持等）；

干预组：常规治疗基础上，每日口服微生物酵素20ml（分2次，餐后服用），持续4周；

观察指标：治疗前、治疗2周及4周后，检测患者肠粘膜通透性指标（尿乳果糖/甘露醇比值，L/M）、粪便菌群多样性（16SrRNA测序）、血清炎症因子，记录感染发生率。

3结果

3.1微生物酵素对ACLF大鼠肠粘膜的保护作用

肠粘膜形态学改善：HE染色显示，ACLF模型组大鼠肠绒毛断裂、水肿，隐窝深度增加；酵素干预组肠绒毛完整性显著提升，隐窝深度较模型组降低28.3%（P0.05）；

紧密连接蛋白表达提升：WesternBlot结果显示，干预组大鼠肠粘膜Occludin、ZO-1蛋白相对表达量分别为模型组的1.82倍、1.76倍（P0.01）；

炎症反应抑制：干预组血清LPS浓度为（0.32±0.08）EU/ml，较模型组（0.85±0.12）EU/ml显著降低（P0.01）；TNF-α、IL-6水平分别降低41.5%、38.2%（P0.05）。

3.2微生物酵素对ACLF病人肠粘膜的保护作用

肠粘膜通透性降低：治疗4周后，干预组尿L/M比值为（0.08±0.02），显著低于对照组（0.15±0.03）（P0.01）；

肠道菌群平衡改善：干预组粪便中乳酸菌、双歧杆菌相对丰度较对照组提升53.6%、48.2%，大肠杆菌丰度降低39.4%（P0.05）；

感染发生率下降：干预组感染发生率（12.5%）显