HaCaT细胞与新生隐球菌体外互作下基因表达谱解析与致病机制洞察.docxVIP

HaCaT细胞与新生隐球菌体外互作下基因表达谱解析与致病机制洞察

一、引言

1.1研究背景

新生隐球菌（Cryptococcusneoformans）是一种广泛存在于自然环境中的致病性真菌，在免疫功能正常或受损的宿主中均可致病，可侵犯包括中枢神经系统、肺和皮肤在内的多个器官。其感染在全球范围内都受到高度关注，尤其是在艾滋病患者等免疫缺陷人群中，新生隐球菌感染是导致严重发病和死亡的重要原因之一。据统计，全球每年约有22.3万例隐球菌性脑膜炎新发病例，病死率高达15%-30%。在免疫功能正常个体中，虽然感染相对较少，但也时有发生，且症状表现多样，诊断和治疗都面临挑战。

在新生隐球菌引发的各类感染中，皮肤感染约占隐球菌感染的15％。然而，原发性皮肤隐球菌病的存在一直备受争议，目前对其认识尚处于早期的临床积累与观察阶段，系统性、基础性的实验研究开展较少。隐球菌最早是作为病原菌从皮损中分离出来的，关于隐球菌如何进入机体这一关键问题，目前国内外观点不一，相关研究也未得出可靠结论。

皮肤作为人体最大的器官，是抵御病原体入侵的第一道防线。角质形成细胞是皮肤表皮的主要组成细胞，在皮肤的生理功能和免疫防御中发挥着关键作用。皮肤隐球菌感染的发生，首先取决于隐球菌与角质形成细胞之间的相互作用，二者相互作用的结果决定着隐球菌感染皮肤的转归及结局。

HaCaT细胞是一种人永生化角质形成细胞系，因其具有无限增殖能力且保留了角质形成细胞的许多生物学特性，成为研究角质形成细胞生物学和皮肤相关疾病的常用细胞模型。研究HaCaT细胞与新生隐球菌在体外作用前后的基因表达谱，有助于深入了解二者相互作用的分子机制，对于揭示皮肤隐球菌病的致病机理具有重要意义。

1.2研究目的与意义

本研究旨在通过基因芯片转录谱分析HaCaT细胞与新生隐球菌作用前后表达谱的改变，从全基因组范围揭示HaCaT细胞为适应或抵御隐球菌生长而发生的基因表达变化。通过对差异表达基因的生物信息学分析，筛选出在二者作用过程中与致病性密切相关的差异表达基因，并对相关基因的功能进行深入分析，从而了解新生隐球菌与HaCaT细胞体外相互作用的详细过程，推测皮肤隐球菌病的可能致病机理与感染播散的相关因素。

本研究的成果将有助于进一步阐明隐球菌的致病机制，为更好地防治隐球菌病提供坚实的理论依据。在临床实践中，对隐球菌病致病机制的深入理解有助于开发更有效的诊断方法和治疗策略，提高对该疾病的早期诊断率和治疗成功率，减少患者的痛苦和死亡率。在基础研究领域，本研究也将为进一步探究真菌与宿主细胞相互作用的分子机制提供新的思路和研究方向，推动相关领域的发展。

1.3国内外研究现状

在HaCaT细胞研究方面，国内外学者已对其生物学特性进行了广泛研究。HaCaT细胞在皮肤生理功能、皮肤疾病发病机制以及皮肤组织工程等领域都有重要应用。例如，在皮肤伤口愈合研究中，通过观察HaCaT细胞的增殖、迁移和分化等行为，揭示了皮肤愈合过程中的细胞生物学机制。在皮肤疾病研究中，利用HaCaT细胞研究银屑病、特应性皮炎等疾病的发病机制，发现了一些与疾病相关的关键信号通路和基因。

对于新生隐球菌，国内外研究主要集中在其分类鉴定、致病机制、耐药机制以及临床治疗等方面。在致病机制研究中，发现新生隐球菌的荚膜多糖、黑色素、漆酶等毒力因子在感染过程中发挥重要作用。在耐药机制研究方面，已明确了一些与新生隐球菌耐药相关的基因和蛋白，为临床治疗提供了理论依据。

在二者相互作用研究方面，已有研究表明新生隐球菌可以对HaCaT细胞产生黏附与侵袭，黏附率与侵袭率呈现时间依赖性，同时还会使HaCaT细胞凋亡率升高，对其造成损伤，且这种损伤与菌体的活力相关。然而，目前对于二者相互作用过程中基因表达变化的研究还较少，尤其是在全基因组水平上的研究更为缺乏。现有研究多局限于单个基因或少数几个基因的研究，无法全面系统地揭示二者相互作用的分子机制。本研究将从全基因组水平对HaCaT细胞与新生隐球菌相互作用前后的基因表达谱进行分析，弥补现有研究的不足，为深入理解皮肤隐球菌病的发病机制提供新的视角和数据支持。

二、材料与方法

2.1实验材料

2.1.1细胞与菌株

实验所用的HaCaT细胞购自中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库。该细胞库对细胞的来源、培养条件、生物学特性等有详细的记录和严格的质量控制，确保了细胞的稳定性和一致性。HaCaT细胞运抵实验室后，迅速复苏并培养于含有10%胎牛血清（FBS）的DMEM高糖培养基中，置于37℃、5%CO?的细胞培养箱中培养，定期观察细胞生长状态，待细胞长满至80%-90%融合度时，进行传代培养，以维持细胞的活性和正常生长。

新生隐球菌标准野生株B35