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人工湿地中好氧化硝化细菌的分离鉴定、反硝化特性及固定化研究

一、引言

1.1研究背景与意义

随着工业化和城市化的快速发展，水体氮污染问题日益严峻，成为全球关注的环境焦点之一。水体中的氮主要来源于工业废水排放、农业面源污染以及生活污水排放等。在工业领域，化工、制药、食品加工等行业产生的废水中含有大量的氮化合物；农业方面，过量使用化肥以及畜禽养殖废水的随意排放，使得大量氮元素流入水体；生活污水中含氮的有机物和含氮洗涤剂的排放同样是水体氮污染的重要成因。

水体氮污染会引发一系列严重的环境问题，其中最突出的便是水体富营养化。过量的氮促使水中藻类等浮游生物迅速繁殖，形成水华或赤潮现象。这些藻类在生长过程中大量消耗水中的溶解氧，当藻类死亡后，其分解过程进一步加剧溶解氧的消耗，导致水体缺氧，使得鱼类等水生生物因缺氧而窒息死亡，严重破坏了水生生态系统的平衡，造成生物多样性的减少。有研究表明，在一些富营养化严重的湖泊中，水生生物的种类和数量明显下降，部分敏感物种甚至濒临灭绝。此外，水体富营养化还会产生异味和毒素，影响饮用水的安全，对人类健康构成潜在威胁。

人工湿地作为一种高效的生态水质净化方法，利用生态系统中基质、植物和微生物的物理、化学和生物的三重协同作用来实现对污水的净化，具有较强的氮、磷处理能力，在污水处理领域应用广泛。其运行过程中可形成良好的内部循环，并具有较好的经济效益和生态效益，是一种目前正被研究、应用和发展的新型污水生态处理技术。在人工湿地系统中，微生物起着关键作用，其中好氧化硝化细菌能够在有氧条件下将氨氮转化为亚硝酸盐氮，进而氧化为硝酸盐氮，是氮循环的重要参与者。对好氧化硝化细菌的深入研究，有助于揭示人工湿地的脱氮机制，提高人工湿地对氮污染物的去除效率，对于解决水体氮污染问题、改善水环境质量具有重要的现实意义。

1.2国内外研究现状

国外对好氧化硝化细菌的研究起步较早，在20世纪80年代，Robertson和Kuenen首次提出了好氧反硝化理论，并从脱硫脱氮污水处理系统中分离出了第一株好氧反硝化菌株——泛硫球菌（现更名为脱氮副球菌Paracoccusdenitrificans）。此后，越来越多的研究关注并证实好氧反硝化细菌的存在及特性。目前已发现的好氧反硝化细菌种类繁多，主要存在于假单胞菌属（Pseudomonas）、产碱杆菌属（Alcaligenes）、副球菌属（Paracoccus）和芽孢杆菌属（Bacillus）等，从土壤、池塘、沟渠、活性污泥以及各种污水处理系统等不同环境中均可分离得到。

在反硝化特性研究方面，国外学者对好氧反硝化细菌的反硝化作用机制进行了深入探究。研究表明，好氧反硝化作用过程同样包括4个还原步骤，依次由硝酸盐还原酶、亚硝酸盐还原酶、一氧化氮还原酶和一氧化二氮还原酶催化完成。但在假想呼吸途径中，好氧反硝化细菌具有特殊之处，即NO??和O?均可作为电子最终受体，电子既可以从被还原的有机物基质传递给O?，也能够传递给NO??、NO??和N?O，并分别将它们还原。此外，国外还在好氧反硝化细菌的基因工程改造、与其他微生物的协同作用等方面开展了研究，旨在提高其脱氮效率和应用范围。

国内对好氧化硝化细菌的研究也取得了一定进展。吕锡武等采用序批式反应器处理氨氮废水，验证了好氧反硝化的存在；罗固源等在无回流间隙曝气系统中发现好氧反硝化脱氮占总氮去除率的30%-40%。近年来，国内在菌株的分离鉴定方面取得了不少成果，从活性污泥、养殖池底泥等不同环境中分离出多株高效好氧反硝化细菌，并对其脱氮特性和影响因素进行了详细研究，发现这些菌株在适宜的条件下能够高效地去除氨氮和总氮。同时，国内学者也开始关注好氧化硝化细菌的固定化技术研究，以提高其在实际应用中的稳定性和重复利用性。

1.3研究内容与技术路线

本研究旨在从人工湿地中分离鉴定好氧化硝化细菌，深入研究其反硝化特性，并对其固定化技术进行探究，具体研究内容如下：

好氧化硝化细菌的分离与鉴定：采集人工湿地样品，通过富集培养、选择性培养基筛选等方法分离好氧化硝化细菌，并利用形态学观察、生理生化鉴定以及16SrDNA序列分析等手段对分离得到的菌株进行鉴定。

好氧化硝化细菌的反硝化特性研究：研究不同环境因素（如温度、pH值、溶解氧、碳源、氮源等）对好氧化硝化细菌生长和反硝化性能的影响，优化其反硝化条件；探究菌株对不同氮源的代谢途径和代谢模式，分析其反硝化过程中的关键酶活性变化。

好氧化硝化细菌的固定化研究：选择合适的固定化载体和固定化方法，对筛选得到的高效好氧化硝化细菌进行固定化；比较固定化前后菌株的反硝化性能，考察固定化颗粒的稳定性和重复利用性；将固定化菌株应用于模拟污水的处理，评估其实际应用效果。

技术路线如图1-1所示