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扩张型心肌病转基因小鼠模型构建与心肌病修饰基因筛选研究

一、引言

1.1研究背景与意义

扩张型心肌病（DilatedCardiomyopathy，DCM）是一类严重危害人类健康的心脏疾病，以左心室或双心室进行性扩大，伴有收缩功能明显减低为主要表现。它是临床中除冠心病、高血压以外，导致进行性心力衰竭和心脏性猝死的第三大病因。患者主要表现为心腔扩大、心功能不全以及恶性心律失常，预后往往不良。流行病学数据表明，DCM实际患病率可能高达1∶250，在全球范围内影响着大量人群，且多发于中青年，给家庭和社会带来沉重负担。其危害主要体现在可能导致严重的心衰，使心脏泵血功能下降，影响全身器官供血和功能；引发严重的心律失常，影响心脏电生理功能；导致血栓栓塞，心脏扩张和心肌炎症引发血液中凝血物质凝固形成血栓；严重时还可能导致猝死，严重的心衰和心律失常可在短时间内导致心脏功能突然丧失。

深入研究DCM的发病机制对于寻找有效的治疗方法至关重要。转基因小鼠模型作为一种重要的研究工具，在揭示疾病发病机制方面具有不可替代的作用。通过构建特定基因修饰的小鼠模型，可以模拟人类疾病的发生发展过程，在可控的实验条件下研究基因与环境因素对疾病的影响，为深入理解DCM的发病机制提供了关键的实验基础。例如，通过构建心肌细胞特异、线粒体靶向过表达calpain-1的转基因小鼠模型，发现当转基因上调的calpain-1水平与病理条件下心肌细胞线粒体内升高的calpain-1水平相当时，转基因小鼠出现了心肌病样改变和心脏功能异常，从而证实了心肌细胞线粒体内calpain-1升高是引起心肌损伤和心脏功能衰竭的重要机制之一。

心肌病修饰基因的筛选同样具有重要意义。在DCM中，遗传因素起着关键作用，约半数特发性DCM与家族遗传性因素相关。然而，基因与疾病表型之间的关系并非简单的一一对应，修饰基因可以通过影响主效基因的表达或功能，在疾病的发生发展过程中发挥重要的调节作用。筛选这些修饰基因有助于更全面地理解DCM的遗传调控网络，为疾病的早期诊断、风险评估和个性化治疗提供新的靶点和理论依据。例如，某些修饰基因可能影响DCM患者对药物治疗的反应，通过识别这些基因，可以为患者制定更精准的治疗方案，提高治疗效果，改善患者预后。

1.2国内外研究现状

在扩张型心肌病转基因小鼠模型建立方面，国内外学者已取得了众多成果。国内如华中科技大学同济医学院附属同济医院陈琛教授和汪道文教授团队构建了DCRT?/?小鼠以及DCRT转基因或过表达小鼠，通过心肌细胞特异性敲除或高表达lncRNADCRT，研究其对心功能的影响，发现lncRNADCRT在维持心肌细胞线粒体稳态方面的重要作用，为DCM发病机制研究提供了新的视角。苏州大学彭天庆教授课题组构建心肌细胞特异、线粒体靶向过表达calpain-1的转基因小鼠模型，明确了心肌细胞线粒体内calpain-1升高与心肌损伤和心脏功能衰竭的关联。国外研究中，也有团队利用心脏特异启动子α-MHC构建转基因表达载体，建立心脏特异表达人多巴胺D5受体突变基因F173L（α-MHC-D5F173L）的转基因小鼠，该小鼠出现典型扩张型心肌病的表型，为研究多巴胺D5受体在心脏肥大发生中的作用机制提供了模型基础。

在心肌病修饰基因筛选领域，国内外也有诸多进展。国内复旦大学附属中山医院舒先红教授团队通过全外显子组测序及家系共分离验证分析，在汉族人群中发现了LMNA基因新的致病基因突变位点：LMNAc.1489-1GC，扩充了汉族人群LMNA致病突变的数据库，对家族性罕见心肌病的精准治疗和防控具有重要价值。国际上，对于DCM致病基因的研究不断深入，已报道的特发性DCM致病基因超过60种，其中TTN是最常见的致病基因，约占DCM致病基因的25%。研究还发现RBM20基因编码的核糖核酸结合模体20蛋白可调控肌联蛋白的拼接，其基因突变患者DCM发病年龄早，容易发展为终末期心力衰竭，死亡率较高。然而，目前对于修饰基因在DCM中的作用机制及相互作用网络的研究仍有待完善，还有大量潜在的修饰基因等待被发现和研究。

1.3研究目标与内容

本研究旨在构建扩张型心肌病转基因小鼠模型，并筛选出与心肌病相关的修饰基因，为深入研究扩张型心肌病的发病机制和寻找新的治疗靶点提供实验依据和理论基础。

围绕上述目标，具体研究内容如下：首先，构建转基因小鼠模型，选取与扩张型心肌病发病相关的关键基因，利用基因编辑技术，如CRISPR/Cas9等，构建心肌特异性过表达或敲除该基因的转基因小鼠模型，通过PCR、Southernblot等方法对转基因小鼠进行基