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2025年沪教版高中生物生物技术实验操作试题集

考试时间：______分钟总分：______分姓名：______

考生注意：请根据所学知识，在答题卡相应位置填涂正确答案或作答。

1.在PCR技术中，用于使DNA变性（使双链解开）的关键步骤及其所需的主要条件是？

2.进行DNA提取实验时，为了破碎细胞壁和细胞膜，常采用哪些物理或化学方法？请列举两种。

3.构建基因表达载体时，除了目的基因，通常还需要哪些关键元件？请写出至少三种。

4.简述观察琼脂糖凝胶电泳结果时，如何判断DNA片段的大小？

5.在微生物培养实验中，为防止杂菌污染，应采取哪些实验室操作规范？

6.动物细胞培养过程中，通常需要提供哪些重要的气体环境条件？为什么？

7.解释“分子信标”探针的基本原理及其在核酸杂交实验中的主要应用。

8.简述植物组织培养过程中，从外植体到再生完整植株通常需要经历哪些关键阶段及其大致顺序。

9.举例说明生物技术在实际农业生产中的应用，并简述其原理。

10.设计一个简单的实验方案，用以检测某水体样品中是否含有特定病原菌（假设已有相应的检测引物和PCR条件）。

11.讨论基因工程操作中，基因表达载体进入宿主细胞的主要方法及其原理的简要区别。

12.在进行植物愈伤组织诱导和分化时，培养基中生长素类和细胞分裂素类激素的比例对愈伤组织分化方向有何影响？请简述其作用机制。

13.什么是基因编辑技术（如CRISPR-Cas9）？简述其基本原理及其在疾病治疗或作物改良中的一个潜在应用。

14.在进行酶活性测定实验时，为使实验结果准确可靠，应如何设置对照组？请列举至少两个必要的对照。

15.简述固定化酶技术的概念及其相比游离酶在工业应用中的优势。

试卷答案

1.关键步骤：变性；主要条件：高温（通常95℃）。

解析思路：PCR的核心步骤之一是变性，通过高温（通常95℃）使DNA双链解开，变为单链，以便引物能够结合。

2.物理方法：破碎（如使用研磨棒、超声波处理、高压匀浆）；化学方法：酶解（如使用纤维素酶、果胶酶）、使用洗涤剂（如SDS）和去垢剂。

解析思路：细胞壁（植物）和细胞膜（动植物细胞）是主要的结构屏障，需要物理力或化学试剂将其破坏，才能释放出内部的DNA。列举两种即可，一种物理一种化学常见。

3.关键元件：目的基因、启动子、终止子、标记基因（如抗性基因）、复制原点（某些载体必需）。

解析思路：基因表达载体是携带外源基因并能在宿主细胞中复制和表达的载体DNA分子，必须包含上述元件才能实现功能。

4.判断方法：比较DNA条带的位置（迁移速度）与已知大小（分子量）的标准DNA分子（Marker）条带的位置。位置越靠下，表示迁移距离越远，对应的DNA片段越短。

解析思路：琼脂糖凝胶电泳依据DNA片段大小不同而迁移速度不同。通过旁边的标准DNAMarker（包含已知大小片段）进行对比，可以确定待测DNA片段的大小。

5.操作规范：严格无菌操作（如在超净工作台操作、火焰灭菌接种环等）、保持器皿和器械清洁、操作前后洗手消毒、避免说话和咳嗽、合理布局实验室等。

解析思路：微生物培养极易受杂菌污染，所有操作需在无菌环境下进行，并遵守无菌操作的基本原则和规范。

6.气体条件：氧气（O2）和二氧化碳（CO2）；原因：细胞代谢需要氧气进行有氧呼吸供能，CO2是光合作用原料（某些培养）或维持细胞内pH稳定。

解析思路：哺乳动物细胞多为有氧型，需要氧气进行呼吸；CO2在细胞外液中有一定的浓度，对维持细胞内外pH平衡有重要作用。

7.基本原理：分子信标是一段两端是茎环结构、中间是探针序列的DNA或RNA分子，在靶标核酸存在时，探针序列与靶标结合使茎环打开，分子构象改变，可发生荧光变化或报告分子释放等信号；主要应用：在溶液中或固相载体上快速、特异地检测目标核酸序列（如DNA、RNA）。

解析思路：分子信标利用构象变化作为信号输出的机制，其探针序列与靶标序列互补结合导致结构变化，这一特性可用于检测。

8.关键阶段及顺序：外植体诱导（形成愈伤组织）、愈伤组织增殖、再分化（形成不定芽或生根）。

解析思路：植物组织培养是体外培养植物细胞、组织或器官的技术，其典型流程包括从初始外植体到再生完整植株需要经历这三个主要阶段。

9.应用实例：利用基因工程培育抗病/抗虫/抗逆作物品种（如将Bt基因转入棉花）；利用基因工程生产药物（如利用工程菌生产胰岛素）。

解析思路：生物技术在农业上可改良作物性状，在医药上可生产治疗性蛋白。选择一个实例并简述原理即可，如抗虫棉是将杀虫蛋白基因导入棉花