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斑点叉尾鮰α干扰素基因在毕赤酵母中的表达及活性研究：技术、影响因素与应用潜力

一、引言

1.1研究背景与意义

斑点叉尾鮰（Ictaluruspunctatus），作为一种原产于美洲的淡水鱼类，自20世纪80年代引入中国后，凭借其生长迅速、肉质鲜美、适应性强等优势，迅速成为我国重要的淡水养殖品种之一。目前，斑点叉尾鮰的养殖范围广泛，涵盖了我国多个省份，形成了较为完善的产业链，在满足国内市场对高品质水产品需求的同时，还大量出口，为我国水产养殖业的经济增长做出了显著贡献。

然而，随着斑点叉尾鮰养殖业的规模化和集约化发展，各种病害问题日益凸显，其中病毒病的危害尤为严重。斑点叉尾鮰病毒病（ChannelCatfishVirusDisease，CCVD）是由疱疹病毒引起的急性传染病，主要危害鱼苗和鱼种。在水温25℃以上，尤其是28-30℃的流行适温下，该病极易突然暴发流行。患病鱼常出现尾向下、头浮于水面，惊动后痉挛式旋转游动，死亡前迟钝、侧卧等症状。外部症状表现为鳞基部、腹部和尾柄处出血，腹部膨大，眼球突出，有时肛门突出，鳃苍白或出血；解剖可见腹腔内有黄色或淡红色腹水，肠道内有淡黄色黏液，脾脏肿大变黑，肾、肝、胃肠道、脾、骨骼肌出血或淤血。该病不仅导致斑点叉尾鮰鱼苗、鱼种大量死亡，成鱼隐性感染成为带毒者，严重影响养殖产量和经济效益，还可能引发其他继发性疾病，进一步加剧病情，给养殖户带来巨大的经济损失，阻碍了斑点叉尾鮰养殖业的可持续发展。

干扰素（Interferon，IFN）是机体细胞在病毒感染，或者受核酸、细菌内毒素、促细胞分裂素等的作用下，由受体细胞分泌的一种具有高度生物学活性的糖蛋白。它具有抗病毒、抗肿瘤、免疫调节等多种生物学功能，在机体对抗病毒感染的防御系统中发挥着关键作用。鱼类干扰素可分为两类，其中I型IFN耐酸、耐热，类似于哺乳动物IFN-α/β，可由病毒和双链RNA（dsRNA）诱导产生；II型IFN即IFN-γ，不耐酸、不耐热，可被有丝分裂原等诱导，由白细胞、T细胞或巨噬细胞产生。在鱼类中，干扰素通过与细胞膜上的干扰素特异性受体结合，依赖Jak-STAT信号途径，合成干扰素激活基因因子（ISGF-3），使细胞膜信号迅速传至细胞核，再与干扰素刺激反应元件（ISRE）结合，促进干扰素激活基因（ISG）的表达，从而抑制某些病毒蛋白的合成，达到抗病毒目的。因此，干扰素在水产养殖抗病毒领域具有广阔的应用前景，有望成为解决斑点叉尾鮰病毒病问题的有效手段。

毕赤酵母（Pichiapastoris）表达系统是一种常用的真核表达系统，在基因工程领域应用广泛。它具有生长迅速、易于培养、表达量高、能对表达蛋白进行正确的折叠和修饰等优点，能够表达和调控各种基因，包括人类基因以及鱼类相关基因。在诱导基因表达时，只需将目标基因转入毕赤酵母细胞内，加入适当的诱导物质即可实现基因的表达和调节。这些优势使得毕赤酵母表达系统在生产具有生物活性的蛋白质方面具有显著的优势，为高效表达斑点叉尾鮰α干扰素提供了可能。

本研究旨在将斑点叉尾鮰α干扰素基因在毕赤酵母中进行表达，通过对表达条件的优化，获得大量具有生物活性的干扰素蛋白。这不仅有助于深入了解斑点叉尾鮰干扰素的抗病毒机制，丰富鱼类免疫学理论，还为开发新型的抗病毒生物制剂提供了实验依据和物质基础。一旦成功开发出基于斑点叉尾鮰α干扰素的抗病毒生物制剂，将为斑点叉尾鮰养殖业提供一种安全、有效的病毒病防治方法，减少化学药物的使用，降低环境污染，保障水产品的质量安全，促进斑点叉尾鮰养殖业的健康、可持续发展。同时，本研究的成果也可能为其他水产养殖品种的病毒病防治提供借鉴和参考，推动整个水产养殖业的技术进步。

1.2国内外研究现状

在国外，对斑点叉尾鮰α干扰素基因的研究开展较早，取得了一系列重要成果。1998年，Chinchar等从斑鮰中检测到鱼类IFN，其性质类似于哺乳型干扰素，为后续的研究奠定了基础。此后，科研人员对斑点叉尾鮰干扰素的基因结构、功能特性等进行了深入研究。研究发现，斑点叉尾鮰干扰素基因具有独特的结构特征，其表达受到多种信号通路的精细调控，在抵抗病毒感染过程中发挥着核心作用。例如，通过对其基因序列的分析，明确了不同亚型干扰素基因的差异，以及这些差异对其生物学活性的影响。在毕赤酵母表达系统的应用方面，国外也有不少成功的案例。毕赤酵母被广泛用于表达各种鱼类免疫相关蛋白，通过优化表达条件，实现了高效表达，为鱼类疾病防治提供了新的策略和产品。一些研究将毕赤酵母表达的鱼类干扰素应用于实际养殖中，取得了较好的抗病毒效果，有效提高了养殖鱼类的存活率和健康水平。

国内对斑点叉尾鮰α干扰素基因的研究也在逐步深入。科研人员成功克隆了