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氨基糖甙类药物对无义突变HERG通道的拯救效应及机制探究

一、引言

1.1研究背景

长QT综合征（LongQTSyndrome，LQTS）是一类严重的遗传性心律失常综合征，以心电图上QT间期延长、T波异常或明显U波为特征，易发展为反复发作的室性心律失常，如尖端扭转型室性心动过速，进而引发晕厥、心脏性猝死等心血管事件，严重威胁患者生命健康。目前，已报道12种长QT综合征的致病基因，其中8种为离子通道基因，其余为与通道相互作用的蛋白基因。

HERG基因（humanether-a-go-go-relatedgene）编码心脏快速激活延迟整流钾电流（I_{kr}）通道的α亚基，在心脏动作电位复极化过程中发挥关键作用。当HERG基因发生突变时，会通过“功能减弱”机制导致长QT综合征2型（LQT2），此亚型约占所有长QT综合征的45%，是较为常见的类型。在已发现的300多个HERG突变位点中，错义突变约占62%，无义和移码突变约占30%，还有少量的码内插入/缺失突变和剪接位点突变等。

以往研究表明，HERG基因错义突变导致LQT2的最重要分子机制是转运缺陷，并且这种转运缺陷可通过低温、HERG通道阻滞剂或其他药物等手段予以纠正。然而，HERG无义突变的情况则有所不同，其往往会引入提前发生的终止密码子，从而产生毒性的截短的通道蛋白，通过“负显性”机制导致LQT2的发生。这种截短的通道蛋白不仅自身无法正常行使功能，还会干扰正常通道蛋白的组装和功能发挥，使得心脏复极化过程异常，增加心律失常的发生风险。

对于HERG基因无义突变能否通过药物纠正，目前尚无相关研究。但在其他一些无义突变所致疾病，如肺囊性纤维化、Duchenne肌发育不良、肾性尿崩症等中，氨基糖甙类抗生素展现出了一定的治疗潜力。氨基糖甙类抗生素不仅具有杀菌活性，还可抑制提前出现的终止密码子，降低翻译的忠实度和准确性，使翻译继续进行，从而产生正常的蛋白质。大量基于组织细胞、动物模型及临床试验的研究表明，氨基糖甙类药物能提高无义突变的翻译通过率，部分恢复目的蛋白的表达和/或功能。早在1985年，就有研究报道G-418能恢复无义突变体的表达水平至野生型的25%。庆大霉素作为氨基糖甙类抗生素的一种，不仅广泛用于临床治疗一些革兰氏阴性菌感染性疾病，且在改善翻译通过率方面一直显示出较好的效果。因此，探究氨基糖甙类药物对无义突变HERG通道的作用具有重要的理论和实践意义。

1.2研究目的与意义

本研究旨在深入探究氨基糖甙类药物对无义突变HERG通道的作用。通过严谨的实验设计和多技术手段结合，精准检测无义突变HERG通道的表达水平，系统探讨氨基糖甙类抗生素G-418和庆大霉素在异源表达系统中对导致LQT2的无义突变的纯合HERG通道的作用效果，并细致分析同一种氨基糖甙类药物对不同突变体作用存在差异性的内在原因，深入阐明HERG基因无义突变致LQT2的发病机制。同时，全面探讨不同氨基糖甙类药物对杂合的HERG通道的干预效应，客观评价不同氨基糖甙类药物对某一种HERG通道的作用差异性，以及检测氨基糖甙类药物对存在转运缺陷的错义突变体是否具有拯救效应。

本研究成果有望为遗传性心律失常的治疗开辟全新的思路，提供坚实的理论依据。在理论层面，进一步丰富和完善对HERG基因无义突变致病机制的认识，拓展对离子通道病发病机制的理解，为后续相关研究奠定基础；在临床应用方面，若能证实氨基糖甙类药物对无义突变HERG通道具有显著的拯救作用，将为LQT2患者提供新的治疗策略和潜在的治疗药物，有望改善患者的预后，降低心律失常和心脏性猝死的发生风险，具有重要的临床价值和社会意义。

二、HERG通道与长QT综合征

2.1HERG通道结构与功能

HERG通道蛋白由1159个氨基酸组成，在结构上与震荡型电压门控钾通道家族成员具有诸多相似之处。该通道由四个亚单位共同构成，每个亚单位均包含6个α-螺旋跨膜结构以及1个环孔区。其中，S1-S4区域主要负责感受细胞膜电位的变化，发挥电压传感器的关键作用，尤其是S4区，包含可调节空间电荷的氨基酸，对电位变化的感知和传导至关重要；而S5、S6以及环孔区则共同构成了离子通道的孔道，为钾离子的进出提供了通道，决定了通道对钾离子的选择性和通透能力。HERG通道的N末端和C末端均位于细胞内，N末端在通道的失活过程中发挥着不可或缺的作用，其结构与per-arnt-sim调节亚单位相关，对通道的动力学特性有着重要影响。

在心脏电生理活动中，HERG