水曲柳愈伤组织不定芽再生机制及FmWIND1基因功能解析.docxVIP

水曲柳愈伤组织不定芽再生机制及FmWIND1基因功能解析

一、绪论

1.1水曲柳研究现状

水曲柳（FraxinusmandshuricaRupr.），隶属于木犀科（Oleaceae）梣属（Fraxinus），是一种落叶大乔木，在我国主要分布于东北、华北地区，如黑龙江的大兴安岭东部和小兴安岭、吉林的长白山等地，同时在朝鲜、日本、俄罗斯等国家也有分布。其生长于海拔700-2100米的山坡疏林中或河谷平缓山地，作为红松阔叶林主要建群种之一，对维持森林生态系统的平衡和生物多样性起着重要作用，已被列为国家Ⅱ级重点保护野生植物。

水曲柳具有极高的经济价值，其木材材质优良，力学强度大，纹理通直，花纹美观，是建筑、家具、室内装修、造船等多种行业及制造军工器械和胶合板等的优良用材，与胡桃楸、黄檗并称为“东北三大硬阔”。除了经济价值外，水曲柳还具有重要的生态价值，其树形圆阔、高大挺拔，适应性强，具有耐严寒、抗干旱，抗烟尘和病虫害的能力，可与许多针阔叶树种组成混交林，形成复合结构的森林生态系统，对提高整个林分的涵养水源、保持水土、防止环境恶化等能力意义重大。此外，水曲柳的树皮可入药，是治疗结核、外伤的传统药物，还可用作驱虫剂，其乙醇提取物有明显的镇痛、消炎作用，香豆素成分具有防治病虫害的作用，同时还具有免疫、抗菌、抗氧化、保肝、利尿、抗过敏、使皮肤再生等功能。

近年来，由于长期的过度砍伐以及生态环境的变化，水曲柳的自然资源急剧减少，种群数量不断下降，目前大树已不多见，多为零星散生。为了保护和恢复水曲柳资源，国内外学者开展了大量研究。在繁殖技术方面，播种繁殖是水曲柳传统繁殖方法，但由于其种子休眠期较长，需要经过较长时间（240-270天）的层积处理，才能打破休眠。无性繁殖方面，水曲柳属于难生根树种，扦插和嫁接技术虽有一定进展，但距离在生产和科研中广泛应用尚有距离。在组织培养方面，已对水曲柳种子无菌发芽与胚轴离体再生、不定芽发生和腋芽增殖途径的植株再生、离体根培养体系的建立、合子胚子叶愈伤组织诱导和增殖等进行了研究，为实现水曲柳苗木的产业化生产奠定了基础。在遗传多样性研究方面，利用分子标记技术对水曲柳不同种群的遗传结构和遗传多样性进行分析，为保护策略的制定提供了理论依据。

1.2植物组织培养再生技术概述

1.2.1白蜡树属组织再生体系

白蜡树属（Fraxinus）植物在全球约有70余种，我国约有20余种。该属植物具有重要的经济和生态价值，如美国白蜡（FraxinusamericanaL.）、欧洲白蜡（FraxinusexcelsiorL.）等在欧美地区广泛用于城市绿化和木材生产，而我国的水曲柳、绒毛白蜡（FraxinusvelutinaTorr）等也是重要的造林和绿化树种。

白蜡树属植物组织再生体系的建立通常包括外植体选择、培养基配制、激素调控以及培养条件优化等关键环节。外植体的选择直接影响到组织培养的成败，常见的外植体有种子、茎段、叶片、子叶、胚轴、胚根等。不同种白蜡树对培养基的要求存在差异，常用的基本培养基有MS（MurashigeandSkoog）培养基、WPM（WoodyPlantMedium）培养基等。在激素调控方面，生长素（如2,4-D、NAA等）和细胞分裂素（如6-BA、TDZ等）的种类和浓度配比对愈伤组织诱导、不定芽分化和生根起着关键作用。例如，在绒毛白蜡的组织培养中，以叶片为外植体时，愈伤组织诱导培养基为4.3g/LMS粉+30g/L蔗糖+8g/L琼脂+0.5mg/L2,4-D+0.5mg/LTDZ+0.5mg/L6-BA，pH为5.8-6.0；而以子叶为外植体时，愈伤组织诱导培养基则为4.3g/LMS粉+30g/L蔗糖+8g/L琼脂+0.5mg/LTDZ+0.25mg/L6-BA，pH为5.8-6.0。

不同种白蜡树在组织再生过程中表现出明显的差异。一些种如美国白蜡，在体细胞胚胎发生方面表现出较高的频率，而另一些种如小叶白蜡（FraxinusbungeanaDC.），可能在不定芽直接发生途径上更为有效。这种差异可能与植物的遗传背景、生理状态以及对外源激素的敏感性等因素有关。此外，培养条件如光照强度、光照时间、温度等也会对不同种白蜡树的组织再生产生不同程度的影响。

1.2.2水曲柳组织培养再生途径

水曲柳组织培养再生途径主要包括直接器官发生、体细胞胚胎再生和愈伤组织再生三种。

直接器官发生是指在外植体上直接诱导出不定芽或不定根，不经过愈伤组织阶段。该途径具有遗传稳定性高、再生周期短等优点。研究表明，以水曲柳的茎尖、腋芽等为外植体，在添加适当细胞分裂素（如