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核糖核酸酶抑制试验反应条件与吸光度检测方法.pdfVIP

核糖核酸酶抑制试验反应条件与吸光度检测方法.pdf

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    10X反应缓冲液：1MTris‑乙酸盐，10mMEDTA，pH6.5。

    100mM胞苷‑2′,3′‑环单磷酸

    设置反应

    酶的系列稀释使用1x反应缓冲液：10ul

    100mM胞苷‑2′,3′‑环单磷酸：2ul10倍缓冲液：

    20ulRNaseA：200ngH2O：至200ul总体积

    200ul

    Mix

    在5分钟反应期间，每20秒间隔在286纳米处检测吸光度。

    重新测试

    10倍缓冲液20ul20ul20ul20ul20ul20ul20ul

    cCMP1ul1ul1ul1ul1ul1ul1ul

    RNase抑制剂20微升10ul5ul2.5微升1.25微升00

    核糖酶10ul10ul10ul10ul10ul10ul0

    H2O149159164166.5168169179

    充分混匀，双份反应

    在0、5、10、15和20分钟时在286纳米处检测吸光度。

    重新测试

    1234567

    10倍缓冲液20ul20ul20ul20ul20ul20ul20ul

    cCMP20ul20ul20ul20ul20ul20ul20ul

    RNase抑制剂Invitrogen20ulInvitrogen5ulMC20ulMC5ul000

    核糖酶A20ul20ul20ul20ul20ug20ul0

    H2O120微升135微升120微升135微升to200ul140ul160微升

    充分混匀，重复反应

    在286纳米处检测吸光度0分钟和37摄氏度下于5、10、15分钟

    10Xreactionbuffer:1MTris-Acetate,10mMEDTA,pH6.5.

    100mMcytidine2′,3′-cyclicmonophosphate

    Setupreaction

    Enzymeserialdilutionwith1xreactionbuffer:10ul

    100mMcytidine2′,3′-cyc

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