水稻纹枯病菌内切葡聚糖酶基因EG146的克隆与表达及功能探究.docxVIP

水稻纹枯病菌内切葡聚糖酶基因EG146的克隆与表达及功能探究

一、引言

1.1研究背景

水稻作为全球最重要的粮食作物之一，是数十亿人口的主食，其产量和质量直接关系到全球粮食安全和人类福祉。然而，水稻在生长过程中面临着诸多病虫害的威胁，其中水稻纹枯病（RiceSheathBlight）是危害最为严重的病害之一。水稻纹枯病广泛分布于世界各水稻产区，给水稻生产带来了巨大的损失，发病田块一般减产10%-30%，严重时产量损失可达50%，甚至更高。随着全球人口的持续增长以及对粮食需求的不断攀升，深入探究水稻纹枯病的致病机制，并寻找有效的防治措施，已成为当前农业领域亟待解决的关键问题。

植物病原真菌的致病性是一个复杂的多基因调控过程，涉及众多基因的参与。研究这些与致病性相关的基因，对于深入理解病原菌的致病机制、开发新的防治策略以及培育抗病品种具有至关重要的意义。内切葡聚糖酶基因EG146作为水稻纹枯病菌中一个重要的致病相关基因，在病菌侵染水稻的过程中可能发挥着关键作用。通过对EG146基因的克隆与表达研究，能够揭示其在水稻纹枯病致病过程中的功能和作用机制，为水稻纹枯病的防治提供新的理论依据和技术手段。

1.2水稻纹枯病概述

1.2.1病害的发生与危害

水稻纹枯病是一种全球性的水稻病害，在亚洲、美洲、非洲等主要水稻种植区均普遍发生。在我国，水稻纹枯病自20世纪70年代以来发病呈上升趋势，各稻区均有分布，其中华南、华中和华东稻区发生较重，已成为水稻生产上的首要病害。该病主要发生在叶鞘和叶片上，严重时可侵入茎秆并蔓延至穗部。发病初期，在近水面的叶鞘上出现椭圆形暗绿色水渍状病斑，随后逐渐扩大为云纹状，中部灰白色，潮湿时变为灰绿色。病斑会由下而上扩展，严重时全穗枯死。水稻纹枯病不仅会导致水稻减产，还会影响稻米的品质，使糙米率、精米率和整精米率下降，垩白粒率和垩白度增加。据统计，我国每年因纹枯病导致的水稻减产超百万吨，对粮食安全构成了重大威胁。

1.2.2病菌的生物学特性

水稻纹枯病菌的无性态为RhizoctoniasolaniKühn，称立枯丝核菌，属半知菌亚门真菌；有性态为Thanatephoruscucumeris(Frank)Donk.，称瓜亡革菌，属担子菌亚门真菌。致病的主要菌丝融合群是AG-1，占95%以上，其次是AG-4和AG-Bb（双核线核菌）。在PDA培养基上，23℃条件下AG-1形成菌核需时3天，菌核深褐色，圆形或不规则形，较紧密，菌落色泽浅褐至深褐色；AG-4菌落浅灰褐色，菌核形成需3-4天，褐色，不规则形，较扁平，疏松，相互聚集；AG-Bb菌落灰褐色，菌核形成需3-4天，灰褐色，圆形或近圆形，大小较一致，一般生于气生菌丝丛中。该病菌寄主范围广泛，除水稻外，还能侵染玉米、小麦、高粱等多种作物以及多种杂草。病菌主要以菌核在土壤中越冬，也能以菌丝体在病残体上或在田间杂草等其它寄主上越冬。菌核数量是引起发病的主要原因，每667平方米有6万粒以上菌核，遇适宜条件就可引发纹枯病流行。菌丝生长温限为10-38℃，菌核在12-40℃都能形成，菌核形成最适温度28-32℃，相对湿度95%以上时，菌核就可萌发形成菌丝。

1.2.3病菌的侵染过程

水稻纹枯病菌主要以菌核在土壤中越冬，翌春春灌时，菌核飘浮于水面与其它杂物混在一起，插秧后菌核粘附于稻株近水面的叶鞘上。在适宜的条件下，菌核萌发长出菌丝，侵入叶鞘组织为害，形成最初的病斑。之后，气生菌丝从病斑处生长并侵染邻近植株，使病害在田间扩散蔓延。在水稻拔节期，病情开始迅速发展，病害向横向和纵向扩展。抽穗前，病菌主要以叶鞘为害对象；抽穗后，病菌进一步向叶片、穗颈部扩展。早期落入水中的菌核也可再次引发稻株侵染，导致病害的多次发生。

1.2.4病菌致病因素

除了内切葡聚糖酶基因EG146外，水稻纹枯病菌的致病因素还包括多种。病菌在侵染过程中会产生毒素，这些毒素能够破坏水稻细胞的生理功能，导致细胞死亡和组织病变。病菌还会形成侵染结构，如附着胞等，帮助病菌更好地侵入水稻组织。细胞壁降解酶也是重要的致病因素之一，除内切葡聚糖酶外，还包括果胶酶、蛋白酶等，它们能够分解水稻细胞壁的成分，使病菌更容易侵入和在组织内扩展。此外，病菌的生长和繁殖速度、对环境的适应能力等也会影响其致病性。

1.2.5病害的防治现状

目前，水稻纹枯病的防治主要采取化学防治、物理防治和生物防治等多种方法。化学防治是目前应用最广泛的防治手段，常用的化学药剂如噻呋酰胺、己唑醇、戊唑醇、丙环唑等，这些药剂能够有效地抑制病菌的生长和繁殖，减轻病害的发生。然而，长期大量使用化学农药也带