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化学酶法：高效合成LNT系列人乳寡糖的新路径

一、引言

1.1研究背景

人乳作为婴儿最理想的营养来源，除了提供基本的营养物质外，还含有多种生物活性成分，对婴儿的生长发育和健康起着至关重要的作用。人乳寡糖（HumanMilkOligosaccharides，HMOs）便是其中一类重要的生物活性成分，它们是母乳中第三丰富的固体成分，含量仅次于乳糖和脂肪，约占母乳中总糖分的20%-25%。尽管HMOs不能被婴儿直接消化吸收供能，但却在婴儿的免疫系统、消化系统和神经系统等方面发挥着不可替代的作用。

在免疫系统方面，HMOs可作为诱饵受体，抑制病原体与宿主细胞的结合，从而抵御病原菌感染。例如，2′-岩藻糖基乳糖（2′-FL）、3′-唾液酸乳糖（3′-SL）等能够有效抑制轮状病毒、新冠病毒以及B族链球菌（GBS）等病原体的感染。同时，部分HMOs还能直接抑制特定病原菌的生长，为婴儿的健康提供一层保护屏障。在消化系统中，HMOs有助于维护肠道微生态平衡，促进有益菌群的生长，如双歧杆菌等，抑制有害细菌的繁殖，进而增强肠道屏障功能。研究发现，添加HMOs可增强肠道上皮细胞表面粘蛋白的分泌，提高跨上皮电阻（TEER）值，减少炎症因子对肠道屏障功能的破坏。此外，HMOs在神经系统发育方面也具有潜在的积极影响，有研究表明其可能通过唾液酸在肝脏代谢后转运至大脑，参与神经节苷脂和唾液酸糖蛋白的形成，或者通过结肠细菌代谢HMOs的产物通过迷走神经刺激大脑活动，从而提升婴儿的认知能力。

LNT系列人乳寡糖作为HMOs中的重要成员，具有独特的结构和显著的生物活性。LNT（lacto-N-tetraose）是一种四糖元结构的人乳寡糖，其结构中包含特定的糖基连接方式，这种独特的结构赋予了它多种生物功能。它不仅可以调节肠道菌群，促进有益菌的增殖，抑制有害菌的生长，还能增强免疫力，帮助婴儿抵抗外界病原体的入侵。此外，LNT在促进婴儿肠道发育和维护肠道健康方面也发挥着关键作用。除了LNT，LNT系列还包括lacto-N-neotetraose（LNnT）、lacto-N-fucopentaoseⅠ（LNFPⅠ）和lacto-N-fucopentaoseⅢ（LNFPⅢ）等，它们各自具有独特的结构和功能，共同构成了LNT系列人乳寡糖的多样性。

由于人乳寡糖在婴儿健康成长中具有不可替代的重要作用，且牛乳中HMOs的浓度远远低于人乳，无法满足婴儿对HMOs的需求。因此，从化学或生物途径合成人乳寡糖，尤其是LNT系列人乳寡糖，具有广阔的研究和应用前景。这不仅有助于优化人工乳配方，使其更接近母乳的营养成分，增强婴幼儿免疫力、促进其生长发育，还能为那些无法进行母乳喂养的婴儿提供更优质的营养来源，具有重要的现实意义。

目前，合成人乳寡糖主要有化学合成和酶合成两种方法。化学合成虽然能够成功合成一些人乳寡糖，但存在合成步骤繁多、成本高昂、纯度较低以及反应条件苛刻等问题，限制了其大规模生产和应用。而酶合成法是一种绿色环保、高效且特异性强的方法，能够在温和的条件下进行反应，减少对环境的影响，并且可以特异性地催化合成目标寡糖。然而，酶合成法仍面临复杂的酶工程问题，如酶的制备、纯化和固定化等，以及高成本的挑战，这在一定程度上阻碍了其工业化应用。因此，探索一种简便、高效、低成本的合成方法成为了当前研究的重点。

1.2研究目的与意义

本研究旨在通过化学酶法合成LNT系列人乳寡糖，充分结合化学合成和酶合成的优势，克服单一方法的局限性，探索出一条高效、低成本的合成路线。具体而言，本研究将深入探究化学酶法合成LNT系列人乳寡糖的反应机制和工艺条件，通过系统地研究反应温度、酶的使用量、反应时间、底物浓度等关键因素对合成反应的影响，优化合成工艺，提高LNT系列人乳寡糖的收率和纯度。同时，运用先进的分析技术，如高效液相色谱（HPLC）、质谱（MS）和核磁共振（NMR）等，对合成产物进行精确的分析与鉴定，确保产物的结构和纯度符合要求。

本研究具有重要的理论和实际意义。从理论层面来看，深入研究化学酶法合成LNT系列人乳寡糖的反应机制和工艺条件，有助于丰富和完善寡糖合成领域的理论知识，为进一步开发新型的寡糖合成方法提供理论基础。通过揭示各反应因素之间的相互作用和影响规律，可以更好地理解寡糖合成过程中的化学和生物学现象，为后续的研究提供指导。从实际应用角度出发，本研究成果有望为生产可供规模化生产的人乳寡糖提供技术支持。随着人们对婴儿健康的关注度不断提高，对高质量婴幼儿配方食品的需求也日益增长。将合成的LNT系列人乳寡糖应用于婴幼儿配方乳制品中，能够显著改善配方奶粉