DB54T 0450-2025 藏猪流行性腹泻病毒荧光定量RT-PCR 检测技术规范.docxVIP

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54

西藏自治区地方标准

DB54/T0450—2025

藏猪流行性腹泻病毒荧光定量RT-PCR检测

技术规范

2025-05-10发布2025-06-10实施

西藏自治区市场监督管理局发布

I

DB54/T0450-2025

目次

前言 II

1范围 1

2规范性引用文件 1

3术语和定义 1

4缩略语 1

5仪器和设备 2

6试剂和耗材 2

7样品采集和处理 2

8核酸提取 3

9荧光定量RT-PCR操作程序 3

10结果判定 3

11生物安全措施 4

附录A（规范性）试剂的配置 5

附录B（规范性）荧光定量PCR引物和Taqman探针的名称和序列 6

附录C（规范性）荧光定量PCR反应体系和条件 7

DB54/T0450-2025

II

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由西藏自治区农业农村标准化技术委员会提出并归口。

本文件起草单位：西藏农牧学院、华中农业大学、甘肃农业大学、西藏自治区动物疫病预防控制中心、林芝市畜牧兽医总站、昌都市畜牧总站。

本文件主要起草人：罗润波、商鹏、邢紫慢、孙煜、金卉、罗锐、甘富斌、张丽鸿、格桑卓玛、张辉、拜占春、韦明邦、蔡重振、钟亚男、李可欣、普布扎西、赵红阳、李沛明、石斌。

DB54/T0450-2025

1

藏猪流行性腹泻病毒荧光定量RT-PCR检测技术规范

1范围

本文件规定了藏猪流行性腹泻病毒荧光定量RT-PCR检测方法的仪器和设备、试剂和耗材、样品采集和处理、核酸提取、荧光定量RT-PCR操作程序、结果判定及生物安全措施等要求。

本文件适用于藏猪肠道内容物、粪便、肠道组织样品中猪流行性腹泻病毒的定性及定量检测。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB19489实验室生物安全通用要求

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范

NY/T1948兽医实验室生物安全要求通则

SN/T4835实验室生物废弃物管理要求

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

逆转录聚合酶链式反应

采用Oligo（dT）或随机引物利用逆转录酶将RNA逆转录成cDNA。再以cDNA为模板进行PCR扩增，获得目的基因或检测基因表达。

3.2

荧光定量PCR

指在PCR反应体系中加入荧光基团、利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，实现对未知模板的定性及定量分析。

3.3

循环阈值

是每个反应管内的荧光信号达到设定阈值时所经历的循环数。

4缩略语

下列缩略语适用于本文件。

PEDV：猪流行性腹泻病毒（PorcineEpidemicDiarrheaVirus）。

DEPC：焦碳酸二乙酯（DiethylPyrocarbonate）。

PBS：磷酸盐缓冲液（PhosphateBufferedSolution）。

PCR：聚合酶链式反应（PolymeraseChainReaction）。

DB54/T0450-2025

2

RT-PCR：逆转录聚合酶链式反应（ReverseTranscriptionPolymeraseChainReaction）。

RNA：核糖核酸（RibonucleicAcid）。

cDNA：互补脱氧核糖核酸（ComplementaryDeoxyribonucleicAcid）。

FAM：荧光素酰胺（FluoresceinAmidite）。

TAMRA：四甲基罗丹明（Tetramethylrhodamin）。

Ct值：循环阈值（Cyclethreshold）。

ddH2O：双蒸水（DoubleDistilledWater）。

5仪器和设备

荧光定量PCR仪、高速冷冻离心机、组织研磨器或者研钵、高压灭菌锅、生物安全柜、分析天平、各型号微量移液器、容量瓶、制冰机等。

6试剂和耗材

除非另有说明，在检测中使用的试剂均为分析纯，所有试剂