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小基因组技术赋能恩拉霉素生产菌种改造：策略、实践与展望

一、引言

1.1恩拉霉素概述

1.1.1恩拉霉素的结构与性质

恩拉霉素是一种由不饱和脂肪酸与十几种氨基酸结合而成的多肽类抗生素，属于有机碱。其主要成分为恩拉霉素A（C_{107}H_{138}N_{26}O_{31}Cl_{2}）和恩拉霉素B（C_{108}H_{140}N_{26}O_{31}Cl_{2}），还含有少量的恩拉霉素C和D。从化学结构来看，恩拉霉素中氨基酸分子构成环状多肽结构，脂肪酸位于多肽结构末端，这种独特的结构赋予了恩拉霉素特殊的理化性质。

在理化性质方面，恩拉霉素盐酸盐为白色或微黄白色结晶性粉末（粗品呈灰色或灰褐色粉末，有特臭），相对分子质量约为2500，熔点在238-245℃。恩拉霉素易溶于稀盐酸和二甲亚砜，可溶于甲醇和含水乙醇，难溶于丙酮，不溶于苯和氯仿等有机溶剂。其盐酸盐对热、光照和潮湿表现出良好的稳定性，在干燥环境中，即使温度高达100℃也不会分解。在饲料中，恩拉霉素同样具有很高的稳定性，室温条件下长期储藏很少降解，制成颗粒料后稳定性更高，与饲料混合后在室温下长期储藏效价下降幅度极小。尤为重要的是，恩拉霉素在消化道内不会被各种酶类降解，能够保持原有的抗菌活性，这一特性使其在实际应用中具有显著优势。

1.1.2恩拉霉素的抗菌机制与应用领域

恩拉霉素的抗菌机制主要是抑制细菌细胞壁的合成。细菌细胞壁主要由黏肽构成，在革兰氏阳性菌中，黏肽占细胞壁总量的65%-95%。恩拉霉素能够阻止黏肽的合成，致使细胞壁缺损，进而导致细胞内渗透压升高，细胞外液渗入菌体，使得细菌变形肿大，最终破裂而死亡。恩拉霉素主要作用于细菌的裂殖阶段，不仅具有杀菌作用，还具备溶菌作用，其最小抑菌浓度（MIC）为0.05-3.13μg/mL。恩拉霉素在需氧和厌氧条件下，对主要的革兰氏阳性菌，如梭状芽孢杆菌、链球菌、葡萄球菌和肺炎双球菌等都展现出强大的抗菌活性。但对大肠杆菌、绿脓杆菌、沙门氏菌和志贺氏菌等革兰氏阴性菌，恩拉霉素的MIC值大于100μg/mL，几乎无抑杀作用。此外，恩拉霉素与目前临床常用的其他抗生素间几乎不存在交叉耐药性，这使得它在抗生素领域具有独特的地位。

基于其良好的抗菌性能，恩拉霉素在多个领域得到应用。在饲料添加剂领域，恩拉霉素只需添加微量就能够呈现出优良的促生长和改善饲料利用率的作用。在畜禽养殖中，恩拉霉素可以提高仔猪的日增重，降低料重比，促进猪的生长；在肉鸡养殖中，能显著改善肉鸡的生产性能，提高饲料转化率。恩拉霉素还可降低粪便中的水分含量，减少鸡粪臭味，降低肉鸡啄肛癖的发生。在医药领域，虽然目前恩拉霉素在临床上的应用相对较少，但由于其对革兰氏阳性菌的强大抗菌活性以及低耐药性的特点，在应对一些耐药性革兰氏阳性菌感染方面具有潜在的应用价值。随着抗生素耐药性问题日益严重，恩拉霉素这种低耐药性的抗生素可能会受到更多的关注和研究，其在医药领域的应用前景也值得期待。

1.2恩拉霉素生产菌种现状

1.2.1杀真菌链霉菌等生产菌种特性

目前，恩拉霉素主要由杀真菌链霉菌（Streptomycesfungicidious）发酵产生。杀真菌链霉菌是一种丝状放线菌，具有典型的放线菌生物学特性。它在生长过程中会形成气生菌丝和基内菌丝，气生菌丝成熟后会分化产生孢子丝，孢子丝形态多样，这是其进行繁殖的重要方式。杀真菌链霉菌的生长需要特定的营养条件，通常需要碳源、氮源、无机盐以及生长因子等。在碳源方面，葡萄糖、玉米粉等都是常用的碳源；氮源则可选用大豆蛋白胨、酵母粉、玉米浆等有机氮源以及硫酸铵等无机氮源。在生长环境方面，杀真菌链霉菌适宜在中性至微碱性的环境中生长，最适生长温度一般在28-32℃。

在恩拉霉素的生产中，杀真菌链霉菌通过一系列复杂的代谢途径合成恩拉霉素。在对数生长期，菌体大量繁殖，同时开始合成恩拉霉素相关的前体物质；进入稳定期后，菌体代谢活动主要集中在恩拉霉素的合成上，通过多种酶的作用，将前体物质逐步转化为恩拉霉素。研究表明，在发酵过程中，通过优化培养基成分和培养条件，可以提高杀真菌链霉菌的生长量和恩拉霉素的产量。添加适量的玉米油、α-乳糖等营养物质，以及控制合适的溶氧水平和pH值，能够显著促进杀真菌链霉菌的生长和恩拉霉素的合成。

1.2.2传统生产菌种存在的问题

尽管杀真菌链霉菌等传统生产菌种在恩拉霉素生产中得到了广泛应用，但它们仍存在一些问题，限制了恩拉霉素产业的进一步发展。传统菌种的发酵效率相对较低，恩拉霉素的发酵单位常常难以达到理想水平，国内恩拉霉素的发酵单位很多低于8000u/mL，这导致生产成本居高不下，生产效率难以满足市场需求的快速增长。传统生产菌种的产量稳定性较差，在不同批次的发酵过程中，