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硅烷偶联剂修饰SLNPs：基因转移载体的性能、应用与展望

一、引言

1.1研究背景与意义

基因治疗自20世纪70年代概念提出以来，经历了漫长的发展历程。从1970年美国医生斯坦利?科恩尝试治疗精氨酸血症的初次失败，到1990年美国国家食品药品监督管理局批准首个基因治疗临床试验，标志着基因治疗正式进入临床研究阶段。然而，1999年JesseGelsinger在基因疗法临床试验中因严重免疫反应去世，以及2002年部分重症联合免疫缺陷（SCID）患者在基因治疗后出现白血病样疾病，使得基因治疗领域遭受重大挫折，人们对其安全性和有效性产生质疑。

进入21世纪，基因治疗逐渐恢复并取得显著进展。2012年欧洲药品管理局（EMA）批准了UniQure公司的基因治疗药物Glybera，随后葛兰素史克（GSK）的Strimvelis、诺华（Novartis）和吉利德（Gilead）的CAR-T疗法Kymriah、Yescarta以及SparkTherapeutics公司基于AAV载体的基因疗法药物Luxturna等相继获批上市，标志着基因治疗药物开始在临床上广泛应用。在中国，基因治疗始于上世纪90年代初，2003年全球首个基因治疗药物“今又生”获批上市。近年来，随着政策支持、技术创新和资本涌入，中国基因治疗进入快速发展期，临床试验数量跃居全球第二。

在基因治疗中，基因载体起着至关重要的作用，它负责将治疗性基因安全、高效地传递到靶细胞中。目前，基因载体主要分为病毒载体和非病毒载体两大类。病毒载体如逆转录病毒、腺病毒、腺相关病毒等，虽然具有较高的转染效率，但存在免疫原性、潜在致癌性以及制备困难等问题。例如，逆转录病毒可能会随机整合到宿主基因组中，导致插入突变和致癌风险；腺病毒容易引发机体的免疫反应，影响治疗效果和安全性。

相比之下，非病毒载体具有低免疫原性、低毒性、制备简单等优点，成为基因治疗领域的研究热点。二氧化硅纳米颗粒（SLNPs）作为一种非病毒基因载体，具有良好的生物相容性、低免疫原性和易制备等特性，展现出了广阔的应用前景。然而，原始的SLNPs表面通常呈电中性或负电性，难以与带负电荷的DNA有效结合并实现高效基因转染。

硅烷偶联剂的出现为解决这一问题提供了新的思路。硅烷偶联剂是一类具有特殊结构的有机硅化合物，其分子中同时含有可水解的基团（如烷氧基、酰氧基等）和有机官能团（如氨基、巯基、乙烯基等）。可水解基团能与SLNPs表面的羟基发生反应，实现硅烷偶联剂在SLNPs表面的固定；有机官能团则可以赋予SLNPs新的性能，如通过氨基化修饰使SLNPs携带正电荷，从而能够与带负电荷的DNA通过静电作用紧密结合，形成稳定的纳米复合物，提高基因传递效率。

本研究聚焦于硅烷偶联剂修饰的SLNPs作为基因转移载体，具有重要的理论和实际意义。在理论方面，深入探究硅烷偶联剂与SLNPs的作用机制、修饰后的SLNPs与DNA的相互作用方式以及在细胞内的转染机制等，有助于丰富和完善纳米基因载体的理论体系，为后续的研究提供坚实的理论基础。在实际应用中，开发高效、安全的硅烷偶联剂修饰的SLNPs基因载体，有望突破现有基因治疗载体的局限，为基因治疗的临床转化提供新的选择，推动基因治疗技术在肿瘤、遗传病、心血管疾病等重大疾病治疗中的广泛应用，为患者带来更多的治疗希望。

1.2研究目的与创新点

本研究旨在深入探究硅烷偶联剂修饰的SLNPs作为基因转移载体的性能和应用潜力。具体而言，首先系统研究不同硅烷偶联剂对SLNPs的修饰方法，通过优化反应条件，实现对SLNPs表面性质的精准调控，制备出具有良好分散性和稳定性、表面电荷适宜的氨基化SLNPs。其次，全面表征修饰后SLNPs的理化性质，包括粒径、Zeta电位、形貌等，并深入研究其与DNA的结合能力、结合方式以及对DNA的保护作用，明确其作为基因载体的基本性能。然后，将修饰后的SLNPs应用于细胞转染实验，评估其在不同细胞系中的转染效率和细胞毒性，筛选出性能优异的基因载体，并初步探索其在基因治疗中的应用效果。

本研究的创新点主要体现在以下几个方面。在修饰方法上，尝试采用多种新型硅烷偶联剂以及改进的修饰工艺，期望实现对SLNPs更高效、更稳定的修饰，与传统修饰方法相比，有望提高修饰的均匀性和可控性，为制备高性能的基因载体提供新的技术手段。在性能研究方面，不仅关注SLNPs作为基因载体的常规性能，如转染效率和细胞毒性，还将运用先进的分析技术，深入研究其在细胞内的摄取途径、转运过程以及基因释放机制等，从分子和细胞层面揭示其作用机理，为基因载体的优化设计