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野鸭Toll样受体3、5、7基因特征与表达规律的深度解析

一、绪论

1.1TLRs研究溯源

Toll样受体的研究历史可以追溯到20世纪80年代。1980年，Nusslein-Volhard等在研究果蝇胚胎发育过程中，发现了一个对果蝇背腹侧分化起关键作用的基因，并将其命名为Toll基因。1988年，Hashimoto等人成功阐明了Toll基因编码的跨膜蛋白质结构。1991年，Gay等人发现Toll蛋白的细胞质部分与哺乳动物天然免疫功能分子——白细胞介素1受体（IL-1R）具有同源性，首次暗示了Toll与免疫之间可能存在关联。1994年，Nomura等人首次报道了人中的Toll样受体，但当时其免疫学功能尚未明确，人们仍认为它与哺乳动物发育相关。直到1996年，JulesA.Hoffmann和同事发现Toll在果蝇抵御真菌感染的免疫过程中发挥重要作用，才确立了Toll的免疫学意义。次年，CharlesJaneway和RuslanMedzhitov证实一种Toll样受体（后被命名为TLR4）能够激活与适应性免疫相关的基因。随后，BruceA.Beutle发现TLR4可探测脂多糖（LPS）的存在，并且当小鼠的TLR4发生突变而失去功能时，小鼠对LPS无反应。此后，科学家通过基因打靶使其他TLR丧失功能进行研究，发现每种TLR能够识别不同类型的分子，至此，Toll样受体在免疫学上的重要意义被全面揭示。

1.2TLRs结构与功能基础

Toll样受体（TLRs）属于Ⅰ型跨膜蛋白，其结构由胞外区、跨膜区和胞内区三部分组成。胞外区含有17-31个富含亮氨酸的重复序列（LRRs），这些LRRs形成特殊的空间结构，构成了配体结合区域，能够特异性地识别病原体相关分子模式（PAMP）。例如，TLR4的胞外区可以识别革兰氏阴性菌细胞壁的主要成分脂多糖（LPS），而TLR5的胞外区则专门识别细菌的鞭毛蛋白。跨膜区由疏水氨基酸组成，主要起到连接胞外区和胞内区的作用，确保TLR在细胞膜上的稳定定位，使受体能够在识别病原体后有效地将信号传递到细胞内部。

胞内区为Toll-IL-1受体结构域（TIR结构域），此结构域与IL-1R家族成员胞浆区高度同源。TIR结构域具有嗜同性相互作用，能够募集下游含有TIR的信号分子，从而组成信号复合体，启动细胞内的信号传导通路。例如，髓系分化因子88（MyD88）就是一种含有TIR结构域的信号分子，在大多数TLR介导的信号通路中，MyD88会首先通过TIR结构域与TLR结合，进而激活下游的信号传导，诱导炎症因子的表达，启动免疫反应。

1.3TLRs信号通路解析

TLRs信号通路主要分为髓样分化因子88（MyD88）依赖型和MyD88非依赖型（也称为TRIF依赖型）信号通路。在MyD88依赖型信号通路中，当TLR识别并结合相应的PAMP后，其TIR结构域会与MyD88的TIR结构域相互作用，招募MyD88。MyD88进而募集白细胞介素1受体相关激酶（IRAK）家族成员，如IRAK1、IRAK4等。IRAK4会磷酸化激活IRAK1，活化的IRAK1再与肿瘤坏死因子受体相关因子6（TRAF6）结合。TRAF6具有泛素连接酶（E3）的活性，它能结合泛素结合酶（E2），通过一系列反应激活转化生长因子β激活激酶1（TAK1）。TAK1可以磷酸化激活IκB激酶（IKK），使IκB发生磷酸化并被降解，从而释放出核因子κB（NF-κB）。NF-κB进入细胞核，与相关基因的启动子区域结合，启动炎症因子如肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素1β（IL-1β）等的转录和表达，引发炎症反应。

在MyD88非依赖型（TRIF依赖型）信号通路中，主要由TLR3和TLR4激活。以TLR4识别LPS为例，LPS与TLR4结合后，会招募含有TIR结构域的接头蛋白TRIF（TIRdomain-containingadaptorinducinginterferon-β）。TRIF可以激活下游的TRAF3，TRAF3再激活干扰素调节因子3（IRF3）。IRF3发生磷酸化后，形成二聚体进入细胞核，诱导干扰素β（IFN-β）等基因的表达，产生抗病毒免疫反应。此外，TRIF还可以通过激活受体相互作用蛋白1（RIP1）等，进一步激活NF-κB，诱导炎症因子的表达，但这一过程相对较为复杂且与MyD