灌洗法提取小鼠肺泡巨噬细胞及体外培养操作规程.docxVIP

ICS07.080CCSB20/39

T/ZHYX

天津市整合医学学会团体标准

T/ZHYX003—2025

灌洗法提取小鼠肺泡巨噬细胞及体外培养操作规程

2025-09-18发布2025-10-01实施

天津市整合医学学会发布

Ⅰ

T/ZHYX003—2025

目次

前言 Ⅱ

1范围 1

2规范性引用文件 1

3术语和定义 1

3.1细胞cell 1

3.2巨噬细胞macrophages 1

3.3肺泡巨噬细胞alveolarmacrophage 1

4缩略语 1

5仪器和材料 1

5.1仪器设备 1

5.2实验材料 2

6细胞提取 2

6.1无菌准备 2

6.2细胞收集 2

6.3细胞培养 2

6.4工艺要求 2

7质量控制 3

7.1细胞形态 3

7.2标记物检测 3

Ⅱ

T/ZHYX003—2025

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。本文件由天津市整合医学学会提出并归口。

本文件由天津市整合医学学会转化医学专委会承办。

本文件起草单位：天津中医药大学，天津医科大学，天津市人民医院，天津市肿瘤医院，四川大学，南开大学。

本文件主要起草人：于海洋，王涛，邱玉玲，韩立峰，苏仁敬，胡高勇，蒲位凌，尹双双，邵莹莹，刘二伟，王冬，张春泽，刘博。

T/ZHYX003—2025

1

灌洗法提取小鼠肺泡巨噬细胞及体外培养操作规程

1范围

本文件规定了灌洗法提取小鼠肺泡巨噬细胞及体外培养的操作程序和一般原则，描述了相应的方法。本文件适用于小鼠肺泡巨噬细胞的制备。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1细胞cell

生物体结构和功能的基本单位，由蛋白质、核酸、脂类和其他一些物质（如水分和无机盐类）按一定方式组成。

3.2巨噬细胞macrophages

一种源于单核细胞的吞噬细胞，能吞噬与分解外来细菌和衰老死亡的细胞碎片，并能捕捉、吞噬、处理和贮存抗原物质，或将其传递给免疫淋巴细胞。

3.3肺泡巨噬细胞alveolarmacrophage

游走入肺泡腔内的巨噬细胞。

4缩略语

AM：肺泡巨噬细胞

BAL灌洗液：支气管肺泡灌洗液

PBS溶液：磷酸缓冲盐溶液

EDTA：乙二胺四乙酸

5仪器和材料

5.1仪器设备

5.1.1超净工作台

5.1.2低温离心机

5.1.3高压灭菌锅

5.1.4恒温水浴锅

T/ZHYX003—2025

2

5.1.5光学显微镜

5.1.6移液器及其设备：量程100μL、200μL、1000μL。

5.1.7电子天平

5.1.8细胞培养箱（37℃,5%CO2）

5.2实验材料

5.2.11mL注射器

5.2.2离心管：1.5mL、15mL、50mL

5.2.3细胞培养板：24孔

6细胞提取

6.1无菌准备

——在开始实验前，超净工作台应使用紫外灯照射25分钟。

——解剖工具、离心管以及BAL灌洗液(含0.5mMEDTA的PBS)等实验期间所需所有耗材及试剂均应进行高压灭菌，并在无菌环境中烘干至完全干燥。

——应保证所有提取过程均在超净工作台中进行。

6.2细胞收集

——按每只小鼠准备一个15mL的离心管，管内装有3mLDMEM完全培养基（10%胎牛血清）。然后将BAL灌洗液在水浴中加热至37℃,并且在整个实验过程中要注意保持温度不变。

——在不破坏颈静脉或气管的情况下，采用颈椎脱位法处死小鼠，并将小鼠在75%酒精中浸泡3分钟，充分消毒。使用解剖工具，切开皮肤、胸腔和肌肉，使肺和气管充分暴露，避免割伤或破裂血管。

——用细剪刀在喉头下方的气管上部做一