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DNA传感器的精准制备及在沙门氏菌DNA与P53基因检测中的应用研究

一、引言

1.1研究背景与意义

在生命科学和医学等众多领域中，对特定DNA序列的准确、快速检测至关重要。DNA传感器作为一种新型的生物传感器，能够将DNA的特异性识别与信号转换相结合，实现对目标DNA的高灵敏度、高选择性检测，在生物检测领域展现出巨大的潜力和应用价值。

沙门氏菌是一种常见的食源性致病菌，每年全球有大量的人因感染沙门氏菌而患病，甚至死亡。根据世界卫生组织公布的数据，全球每年有超过1亿人感染沙门氏菌，而中国疾病预防控制中心营养与健康所监测数据显示，在中国由细菌引起的食源性疾病事件中，沙门氏菌感染占比约70%-80%。传统的沙门氏菌检测方法，如细菌培养法，虽然是检测的“金标准”，但存在检测周期长（通常需要4-7天）、操作繁琐等问题，难以满足快速诊断和食品安全现场检测的需求。DNA传感器用于沙门氏菌DNA检测，能够大大缩短检测时间，提高检测效率，对于预防和控制食源性疾病的爆发，保障食品安全具有重要意义。通过快速准确地检测食品中的沙门氏菌DNA，可及时采取措施，防止受污染食品流入市场，保护公众健康。

P53基因是一种重要的抑癌基因，在细胞生长、凋亡、DNA修复等过程中发挥着关键作用。大约50%以上的人类恶性肿瘤中都存在P53基因的突变，检测P53基因的突变情况对于癌症的早期诊断、治疗方案的选择以及预后评估都具有重要的临床意义。目前常用的P53基因检测方法，如聚合酶链式反应（PCR）-测序技术，虽然准确性高，但设备昂贵、操作复杂，需要专业技术人员和特定的实验环境。开发一种简单、快速、灵敏的DNA传感器用于P53基因检测，能够为癌症的早期筛查和诊断提供有力的工具，有助于提高癌症患者的生存率和生活质量。

1.2研究目的与创新点

本研究旨在制备一种高性能的DNA传感器，实现对沙门氏菌DNA和P53基因的高灵敏度、高特异性检测。具体目标包括：优化DNA传感器的制备工艺，提高传感器的稳定性和重复性；研究传感器与目标DNA之间的相互作用机制，为传感器的性能提升提供理论基础；将制备的DNA传感器应用于实际样品中沙门氏菌DNA和P53基因的检测，验证其实际应用价值。

本研究的创新点主要体现在以下几个方面：在传感器制备材料上，引入新型纳米材料，如石墨烯量子点、金属有机框架等，利用其独特的物理化学性质，提高传感器的信号响应强度和检测灵敏度；采用新的DNA固定化技术，如点击化学、层层自组装等，实现DNA探针在传感器表面的高密度、定向固定，增强传感器与目标DNA的杂交效率和特异性；构建一种多信号放大策略，结合酶催化反应、纳米材料的信号放大效应以及核酸等温扩增技术，进一步提高传感器对痕量目标DNA的检测能力，有望突破现有检测技术在灵敏度方面的限制。

1.3国内外研究现状

在DNA传感器制备方面，国内外研究人员进行了大量的探索。在电极材料的选择上，除了传统的玻碳电极、金电极等，新型碳材料如石墨烯、碳纳米管等因其具有大的比表面积、良好的导电性和生物相容性，被广泛应用于DNA传感器的构建，能够有效提高传感器的性能。在DNA探针的固定方法上，除了物理吸附、化学共价键合等常规方法外，基于生物素-亲和素特异性结合的生物偶联技术以及基于分子间弱相互作用的自组装技术也得到了深入研究，这些方法能够提高探针固定的稳定性和活性。

在沙门氏菌DNA检测方面，已有多种DNA传感器被报道。一些研究通过设计特异性的DNA探针，利用电化学DNA传感器实现了对沙门氏菌DNA的快速检测，检测限可达纳摩尔级别。也有研究将荧光技术与DNA传感器相结合，基于荧光共振能量转移（FRET）原理构建荧光DNA传感器，提高了检测的灵敏度和选择性。然而，这些传感器在实际应用中仍存在一些问题，如抗干扰能力较弱、检测过程复杂等，需要进一步优化和改进。

对于P53基因检测，DNA传感器同样取得了一定的研究进展。有研究利用表面等离子体共振（SPR）DNA传感器，通过实时监测P53基因与探针的杂交过程，实现了对P53基因突变的快速检测。还有研究开发了基于纳米材料标记的电化学发光DNA传感器，对P53基因的检测具有较高的灵敏度和特异性。但目前这些检测方法在检测的便捷性、成本以及对复杂样品的适应性等方面还存在不足，限制了其临床广泛应用。

二、DNA传感器制备的理论基础

2.1DNA传感器的工作原理

2.1.1电化学DNA传感器原理

电化学DNA传感器是基于电信号变化来检测目标DNA的一类传感器，其核心在于利用DNA杂交前后电极界面