土壤微生物监测案例分析白婕60课件讲解.pptxVIP

土壤微生物监测案例分析

主讲人：白婕

某城市郊区有一块长期闲置的土地，该土地周边存在一些工业厂房，现该土地计划复耕，怀疑土壤可能受到一定程度的污染，我们需要做些什么呢?

确定因素：实验目的、样品数量、采样方法、采样工具、交通、线路、天气。

记录内容：采样报告详细记录采样的具体情况，包括日期、时间、位置（GPS定位）、天气状况（气温、降水、湿度、云等）。

2.方法的验证步骤

分析方法的验证是确保其可靠性和适用性的重要过程。验证步骤包括：线性范围的确定、检出限和定量限的测定、精密度的评估、准确度的验证等。

样品处理：过2mm土壤筛，粘性大时用镊子除杂物。

样品保存：放入无菌自封袋、牛皮纸或螺口管，记录样本量。

样品运输与保存：用干冰或冰袋降温，迅速运回实验室-80℃保存。

土壤悬液制备

称取10g新鲜土壤样本放入装有90mL无菌生理盐水（0.85%NaCl溶液）的三角瓶中，将三角瓶置于摇床中，以150rpm的速度振荡30分钟，使土壤微生物均匀分散在悬液中。制备成10-1土壤悬液。

用无菌移液管吸取1mL10-1土壤悬液至装有9mL无菌生理盐水的试管中，充分混匀，得到10-2土壤悬液。

按照上述方法，依次进行10-3、10-4、10-5、10-6等梯度稀释，制备一系列不同浓度的土壤悬液，用于后续微生物的分离培养。

手工分拣法和化学驱赶法

操作：吸取0.1mL不同浓度悬液涂布在相应固体培养基平板（细菌用牛肉膏蛋白胨培养基，真菌用马铃薯葡萄糖琼脂培养基，放线菌用高氏一号培养基），每个浓度3个重复平板。

大肠杆菌菌落特征

5.微生物计数与鉴定

计数方法：选择菌落数30~300平板计数。

5.微生物计数与鉴定

例：某一稀释度下平板上的平均菌落数为150个，稀释倍数为10-4，涂布体积为0.1mL，则每克土壤中该微生物的数量为150÷0.1×104=1.5×107（个/克）。

生物化学实验

分子生物学

小结

闲置土地土壤微生物的种类、数量和分布情况

评估土壤的生态功能和健康状况

小结

为土地复耕过程中的土壤改良、施肥策略以及污染修复等提供重要的参考依据

小结

助力实现土地资源的可持续利用

微生物监测在环境保护和农业发展中的关键作用

使用无菌涂布棒将土壤悬液均匀涂布在平板表面时，每个浓度应设置多少个重复平板，以确保实验结果的准确性和可靠性？

思考题