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2025/07/22

临床免疫检验学抗血清的纯化

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CONTENTS

目录

01

抗血清纯化的目的

02

抗血清纯化的方法

03

抗血清纯化技术流程

04

抗血清纯化的应用

05

抗血清纯化注意事项

抗血清纯化的目的

01

提高特异性

去除交叉反应物质

通过纯化过程去除与目标抗原交叉反应的物质，确保检测结果的准确性。

增强抗体亲和力

纯化过程中选择性地保留高亲和力抗体，提高检测的灵敏度和特异性。

减少非特异性结合

利用纯化方法削减抗血清里的非特异蛋白质成分，减弱背景杂音，从而提高检测水平。

优化抗体纯度

提升抗体纯度，保障实验数据准确，助力临床诊断获取精确信息。

减少非特异性反应

提高检测特异性

通过纯化抗血清，去除无关蛋白，确保检测结果的特异性，减少假阳性。

降低背景信号干扰

通过纯化步骤去除杂质蛋白，降低背景干扰，从而确保实验数据的清晰与可信度。

增强实验重复性

经过抗血清的纯化处理，特异性反应降低，实验结果的稳定性明显增强。

抗血清纯化的方法

02

沉淀法

盐析法

采用中性盐，例如硫酸铵，促使蛋白质凝固沉淀，进而实现从抗血清中提取抗体。

有机溶剂沉淀法

通过乙醇或丙酮等有机溶剂减少水的介电性能，引起蛋白质析出，便于抗血清的纯化处理。

色谱法

离子交换色谱法

采用抗血清中蛋白质电荷差异进行分离，适宜于大范围抗血清的纯化处理。

亲和色谱法

通过特定配体与目标蛋白的特异性结合，实现高选择性的抗血清成分纯化。

凝胶过滤色谱法

根据分子大小和形状的不同，通过凝胶介质分离抗血清中的不同分子。

反相色谱法

通过疏水作用机制，对抗血清中的蛋白质进行与小分子杂质的分离处理，特别适合用于疏水性蛋白质的纯化工艺。

亲和层析法

选择合适的配体

在亲和层析过程中，挑选能与目标蛋白精确结合的配体十分关键，这包括抗原或抗体等。

层析柱的制备

将层析介质与配体结合，形成层析柱，为后续的纯化工作奠定基础。

洗脱和收集

通过特定的缓冲液洗脱结合的目标蛋白，并收集洗脱液以获得高纯度的抗血清。

免疫吸附法

盐析法

通过添加硫酸铵等中性盐，促使蛋白质形成沉淀，进而实现从抗血清中提取抗体。

有机溶剂沉淀法

采用乙醇或丙酮等有机溶剂降低溶液的介电性，从而引起蛋白质的沉淀，以实现对抗血清的纯化。

抗血清纯化技术流程

03

样品准备

提高检测特异性

经过纯化抗血清，淘汰非特异性蛋白，以增强检测结果的准确性，降低假阳性的发生。

降低背景信号干扰

通过纯化步骤清除杂质，降低背景噪声，从而确保实验数据的精确性和可信度。

优化实验重复性

纯化后的抗血清具有更一致的成分，提高实验的重复性和可比性。

纯化步骤

离子交换色谱法

通过抗血清蛋白质电荷差异实现分离，适合大规模抗血清纯化应用。

亲和色谱法

通过特定配体与目标蛋白的特异性结合，实现高选择性的抗血清成分纯化。

凝胶过滤色谱法

分离分子，依据分子大小差异，是清除抗血清中小分子杂质的常规方法。

反相色谱法

利用疏水作用力分离抗血清中的不同蛋白质，适用于疏水性蛋白的纯化。

纯化后处理

选择合适的配体

针对目标蛋白的特性，挑选特定的配体，例如抗原或抗体，以达成精确的结合。

层析柱的制备

将配体偶联到层析介质上，填充层析柱，准备进行抗血清的纯化。

洗脱和收集

通过调整缓冲液条件，洗去非特异性结合的蛋白质，并收集目标蛋白质。

抗血清纯化的应用

04

临床诊断

盐析法

通过添加中性盐，例如硫酸铵，促使蛋白质沉淀，进而实现对抗血清中抗体的分离。

有机溶剂沉淀法

采用乙醇或丙酮等有机试剂，降低溶液的介电性，进而引起蛋白质沉淀，以提取抗血清中的抗体。

研究开发

去除交叉反应性抗体

通过纯化技术去除与多种抗原交叉反应的抗体，确保检测的特异性。

增强检测灵敏度

经精炼的抗体能够更精准地辨别特定抗原，增强检测的敏感性与精确度。

减少非特异性背景干扰

纯化过程可以减少样本中的非特异性背景，使结果更加清晰可靠。

优化抗血清的亲和力

通过提升纯化程度，增强抗血清内抗体的结合力度，确保其与特定抗原的结合更为紧密。

抗血清纯化注意事项

05

纯化过程中的问题

盐析法

通过添加中性盐，例如硫酸铵，诱导蛋白质凝聚，进而实现从抗血清中提取抗体。

有机溶剂沉淀法

通过将乙醇或丙酮等有机溶剂与水相混合，调整蛋白质的溶解性，从而达到抗体沉淀分离的效果。

纯化后的质量控制

离子交换色谱法

利用抗血清中蛋白质的电荷差异进行分离，适用于大规模抗血清纯化。

亲和色谱法

利用特定配体与目标蛋白的专一性联结，达成高效筛选的抗血清组分精炼。

凝胶过滤色谱法

分离分子大小，此方法常用于抗血清中大、小分子物质的区分。

反相色谱法

利用疏水性差异进行分离，适用于疏水性蛋白的抗血清纯化过程。

THEEND

谢谢