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生物技术通报

·技术与方法·BIOTECHNOLOGYBULLETIN()

2023,3912:90-98

荧光素酶辅助定量大肠杆菌破碎效果的方法

11221

李奕雅 吴一凡 丁能水 范小萍 陈凡

（1.闽南师范大学生物科学与技术学院，漳州363000；2.福建傲农生物科技集团股份有限公司，漳州363000）

摘要：建立基于萤火虫荧光素酶的大肠杆菌超声破碎辅助定量方法，利用荧光素酶灵敏度高、检测迅速的特点，对靶细

胞的破碎效果进行表征。以表达了萤火虫荧光素酶的大肠杆菌作为内标，在破碎前与靶蛋白表达菌按一定比例混合，考察不同破

碎条件下荧光素酶和靶蛋白活性向胞外释放的情况，对辅助定量效果进行评价。结果表明，将表达了萤火虫荧光素酶的大肠杆菌

按1∶500（体积比）同待破碎菌悬液混合，能够通过破碎后上清液中荧光素酶活性的变化，正确反映靶细胞的破碎程度，并为破

碎过程中蛋白质的活性保存提供参考。破碎产物中引入的荧光素酶，对后续靶蛋白的镍珠法纯化没有影响。含有萤火虫荧光素酶

的菌体，可在‑80℃环境下保存至少90d而不产生酶活性的显著下降，且细胞对超声破碎的耐受性也不因冻存改变，可在临用前

直接解冻并与靶细胞混合，起到辅助定量作用。因此，利用萤火虫荧光素酶对大肠杆菌超声破碎的程度进行辅助定量，是简便、

稳定且高效的。

关键词：荧光素酶；超声破碎；大肠杆菌；定量分析

DOI：10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2023‑0129

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EstablishmentofaLuciferaseassistedQuantitativeMethodfor

MeasuringUltrasonicDisruptionofEscherichiacoliCells

11221

LIYi‑yaWUYi‑fanDINGNeng‑shuiFANXiao‑pingCHENFan

（1.SchoolofBiologicalScienceandBiotechnology,MinnanNormalUniversity,Zhangzhou363000;2.FujianAonongBiologicalScienceand

TechnologyGroupCo.Ltd,Zhangzhou363000）

Abstract: Inthisstudy,wepresentanovelandeffectivemethodformeasuringultrasonicdisruptionofEscherichiacolicellsbased

onfireflyluciferase.Thisquantitativeapproachprovideshighsensitivityandrapiddetectionofcelldisruption,bywhichthedisruptionwas

chara