分子生物学常用技术凝胶电泳.pptVIP

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电泳基本原理;电泳技术就是利用在电场的作用下,由于待分离样品中各种分子带电性质以及分子本身大小、形状等性质的差异,使带电分子产生不同的迁移速度,从而对样品进行分离、鉴定或提纯的技术。;二、主要方法;不用支持体的电泳技术:

1、Tiselius电泳

2、显微电泳

3、等电点聚焦电泳技术

4、等速电泳技术

5、密度梯度电泳

;DNA电泳;DNA分子带负电,向正电方向游泳;(一)琼脂糖凝胶电泳;琼脂糖Agarose;不同浓度琼脂糖分离DNA分子的范围;琼脂糖浓度(%)分离范围(kb)

0.51.0~30

0.70.8~12

1.00.5~10

1.20.4~7

1.50.2~3

2.00.05~2;质粒DNA分子有三种构型,即CCCDNA、OCDNA和LDNA,这三种构型的质粒DNA分子在凝胶电泳中的泳动率不同,因此电泳后呈三条带,CCCDNA泳动最快,其次是LDNA,最慢的是OCDNA

EB:即溴化乙锭,它能够插入DNA分子中的碱基对之间而与DNA结合。由于EB分子的插入,在紫外光的照射下,凝胶电泳中的DNA条带呈现出红色荧光,易于检测。可以检测10ng的DNA

注意:EB是一种诱变剂,操作时一定要注意安全,必须戴塑料或乳胶手套

;环形双链的质粒DNA分子具有三种不同的构型;琼脂糖凝胶中DNA的观察;琼脂糖凝胶电泳主要实验器材;电泳槽结构;操作步骤;溶胶;准备胶槽;凝胶冷却至50°C,加EB至终浓度0.5μg/ml;铺胶;;加缓冲液;准备样品;点样;电泳;;紫外灯下观察电泳结果;;(二)聚丙烯酰胺凝胶电泳;德厚行远,因尔成道;迷你垂直型电泳槽;DNA序列分析电泳槽;中型双垂直电泳槽;蛋白电泳;(三)醋酸纤维素薄膜电泳;(四)等电聚焦电泳技术;IEF的基本原理?;德厚行远,因尔成道;谢谢大家!

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