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2025/07/23单抗的制备、纯化和鉴定汇报人：_1751850234

CONTENTS目录01单抗的基本概念02单抗的制备方法03单抗的纯化技术04单抗的鉴定方法

单抗的基本概念01

单抗的定义单克隆抗体的来源单抗是由单一的B细胞克隆产生的，具有高度特异性的抗体。单克隆抗体的结构单克隆抗体拥有两个相同的抗原结合部位，能够专门连接到一个特定的抗原决定簇上。单克隆抗体的应用单克隆抗体在疾病诊断、治疗领域及生物科技研究中得到广泛运用，尤其在癌症靶向治疗方面具有显著效果。

单抗的分类按来源分类单抗根据其来源，主要分为鼠源、人源、嵌合以及人源化单抗四大类。按结构分类单克隆抗体根据其结构特征，可以分为IgG、IgM、IgA等多种类型，每种类型均具有独特的构造与功能。按作用机制分类根据作用机制，单抗可分为阻断型、激动型、中和型等。按临床应用分类单抗按临床应用可分为治疗性单抗和诊断性单抗，用于不同疾病诊断和治疗。

单抗的制备方法02

杂交瘤技术免疫小鼠制备通过反复对小鼠进行免疫操作，促使它们产生具有特定针对性的抗体，从而为后续的细胞融合步骤创造条件。细胞融合过程将小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合，形成杂交瘤细胞，具备无限增殖和产生抗体的能力。筛选与克隆化利用HAT培养基对杂交瘤细胞进行筛选，接着实施克隆化培养，以实现单克隆抗体的稳定性。

基因工程方法单克隆抗体的基因克隆利用PCR技术对特定抗体基因片段进行扩增，随即将其转移并整合至表达载体的基因组中。表达载体的选择与构建选取适宜的表达系统，如大肠杆菌或哺乳动物细胞，来构建含有抗体基因的表达载体。细胞转染与筛选将构建好的表达载体转染到宿主细胞中，通过筛选获得稳定表达单抗的细胞株。优化表达条件调整培养条件和参数，如温度、pH值、营养成分等，以提高单抗的表达量和活性。

单克隆抗体库技术杂交瘤技术通过融合B细胞与骨髓瘤细胞，制造出能分泌特定单克隆抗体的杂交细胞。噬菌体展示技术通过噬菌体表面展示抗体片段，经过筛选，成功获取了对目标抗原具有特异结合能力的单克隆抗体。细胞筛选与鉴定通过流式细胞术等方法筛选出高亲和力的单克隆抗体，并进行功能性鉴定。

单抗的纯化技术03

离子交换层析免疫小鼠制备抗体通过反复免疫小鼠，成功获取特定抗体，为后续杂交瘤细胞的培育奠定了基础。脾细胞与骨髓瘤细胞融合将免疫后的小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合，形成杂交瘤细胞，具备无限增殖和分泌抗体的能力。筛选和克隆化运用HAT培养基对杂交瘤细胞进行筛选，随后实施克隆化培育，以此保障单克隆抗体的统一性及稳定度。

亲和层析杂交瘤技术融合B细胞与骨髓瘤细胞，杂交瘤技术得以制造出大量单克隆抗体。噬菌体展示技术通过噬菌体展示技术，抗体库得以在噬菌体表面展示，从而筛选出高特异性的单克隆抗体。酵母表面展示技术酵母表面展示技术通过将抗体基因插入酵母基因组，使抗体在酵母表面表达，用于筛选和鉴定。

凝胶过滤层析单克隆抗体的基因克隆通过PCR技术扩增特定的抗体基因片段，然后将其克隆到表达载体中。细胞表达系统的选择挑选适宜的宿主细胞，包括CHO细胞以及HEK293细胞，以进行重组单克隆抗体的表达。抗体的表达与分泌在宿主细胞内实现重组抗体基因的表达，随后从细胞培养液中提取分泌的抗体蛋白质。抗体的后修饰处理对表达的抗体进行糖基化、折叠等后修饰处理，确保其生物活性和稳定性。

超滤技术按来源分类根据其来源，单克隆抗体可区分为鼠类、人类、嵌合型以及人源化型。按结构分类单抗按结构可分为IgG、IgM、IgA等不同类别，各有其特定结构和功能。按作用机制分类依据其功能原理，单克隆抗体可划分为中和抗体、激活剂抗体以及阻断抗体等类别。按应用领域分类单抗在临床应用中，根据治疗领域不同，可分为肿瘤治疗、自身免疫疾病治疗等。

单抗的鉴定方法04

免疫学鉴定单克隆抗体的来源单克隆抗体源自单一B细胞株，具备极高的特异性。单克隆抗体的结构单抗具有两个相同的抗原结合位点，能特异性结合一个抗原决定簇。单克隆抗体的应用单克隆抗体在疾病检测、疾病治疗及生物科学研究领域得到了广泛应用，尤其是在癌症的靶向治疗中表现突出。

生物活性测试抗体库的构建通过提取免疫细胞或骨髓细胞，构建含有多种抗体基因的文库，用于筛选特定的单克隆抗体。筛选特异性抗体采用抗原与抗体间的亲和力，通过亲和层析等方法，从抗体库中挑选出能与特定抗原相匹配的单克隆抗体。抗体的表达与纯化将所筛选出的抗体基因导入到宿主细胞中，实现表达并获取高纯度的单克隆抗体，以供后续研究和治疗使用。

分子生物学鉴定单克隆抗体的来源单克隆抗体源自单一B细胞株，展现出极高的针对性。单克隆抗体的结构该抗体含有两个相同的结合抗原的决定因子，能够专一性地与一个特定的抗原部位相结合。单克隆抗体的应用单抗广泛应用于疾病诊断、治疗和生物技术研究，如癌症治疗中的靶向药物。

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