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检验操作试卷及解析

单项选择题（每题2分，共20分）

1.下列哪种方法不属于无菌操作？（A）

A.灼烧接种环

B.灭菌锅使用

C.酒精灯火焰灭菌

D.超净工作台操作

2.细胞培养中，胰蛋白酶消化细胞的最佳pH值是？（C）

A.7.0

B.8.0

C.7.4

D.6.5

3.实验室中，哪项操作可能导致气溶胶污染？（B）

A.瓶口用棉塞封口

B.猜测接种时开盖

C.使用无菌吸管

D.液氮保藏样品

4.下列哪种培养基适合酵母菌培养？（C）

A.TrypticSoyAgar

B.MacConkeyAgar

C.YPDAgar

D.BloodAgar

5.纯化蛋白时，SDS主要分离依据是？（A）

A.分子量

B.等电点

C.糖含量

D.氨基酸序列

6.下列哪个不是PCR反应的必要成分？（D）

A.DNA模板

B.引物

C.DNA聚合酶

D.染料

7.细胞计数时，使用血球计数板的优势是？（B）

A.自动化操作

B.高精度计数

C.快速结果

D.无需染色

8.哪种方法常用于基因测序？（A）

A.Sanger测序

B.凝胶电泳分离

C.离心沉淀

D.显微镜观察

9.实验室中，使用移液枪时错误的是？（C）

A.吸液前轻弹枪头

B.定量时缓慢释放

C.重复吸取同一瓶液多次

D.使用后清洁枪头

10.细胞冻存时，常用冻存液成分是？（B）

A.蛋白质

B.DMSO

C.血清

D.葡萄糖

多项选择题（每题2分，共20分）

1.无菌操作的关键步骤包括？（ABCD）

A.手部消毒

B.工作台灭菌

C.无菌容器

D.避免说话

2.细胞培养的常见污染源有？（ABC）

A.空气

B.器皿

C.食物残渣

D.实验服

3.PCR实验中可能出现的失败原因？（ABD）

A.引物设计不当

B.模板降解

C.电解质不足

D.循环数不足

4.实验室安全操作包括？（ACD）

A.穿实验服

B.带隐形眼镜

C.使用护目镜

D.远离明火

5.蛋白质纯化的方法有？（BCD）

A.电泳分离

B.亲和层析

C.离子交换层析

D.凝胶过滤

6.基因克隆的步骤包括？（ABC）

A.PCR扩增

B.连接载体

C.转化宿主菌

D.电子显微镜观察

7.细胞冻存时需要注意？（ABD）

A.缓慢降温

B.使用冻存液

C.直接置于-80℃

D.解冻时避免剧烈晃动

8.实验室废弃物处理原则？（AD）

A.分类收集

B.直接丢弃

C.随意堆放

D.消毒后处理

9.显微镜使用的注意事项？（BC）

A.常用酒精擦拭镜头

B.使用专用擦镜纸

C.高倍镜前先低倍观察

D.直接用镜头纸清洁油污

10.细胞培养的常用工具？（ABCD）

A.CO2培养箱

B.超净工作台

C.移液器

D.倒置显微镜

判断题（每题2分，共20分）

1.细胞培养液需要每3天更换一次。（×）

2.PCR产物可以通过凝胶电泳检测。（√）

3.实验室中所有操作均需佩戴手套。（√）

4.细胞冻存时DMSO浓度通常为10%。（√）

5.纯化蛋白时硫酸铵沉淀法属于盐析。（√）

6.无菌操作时酒精灯火焰可以杀死所有微生物。（×）

7.细胞计数时血球计数板需每天校准。（√）

8.基因测序只能检测已知序列。（×）

9.实验室所有玻璃器皿需高压灭菌。（√）

10.细胞培养时CO2浓度通常为5%。（√）

简答题（每题5分，共20分）

1.简述无菌操作的三个关键原则。

答：避免污染源接触、减少空气流动、严格消毒灭菌。

2.如何判断细胞培养基是否变质？

答：观察是否有浑浊、变色、长霉，或使用无菌水检测pH值变化。

3.PCR实验中，引物设计的要点有哪些？

答：特异性高、GC含量适中（40%-60%）、避免二聚体形成、引物间无互补。

4.细胞冻存时为何需要缓慢降温？

答：防止细胞内形成冰晶损伤细胞膜，逐步降低细胞内液浓度减少渗透压损伤。

讨论题（每题5分，共20分）

1.如何减少实验室中的交叉污染？

答：分区操作、定期消毒、不同实验用不同设备、避免手部接触样品表面。

2.细胞培养中，如何判断细胞状态？

答：观察形态是否正常、生长速度、有无污染迹象（如颜色变化、气泡），可通过台盼蓝染色检测活力。

3.PCR实验失败的可能原因及解决方法？

答：失败原因包括引物问题、模板质量、反应条件；解决方法需优化引物、纯化模板、调整退火温度等。

4.细胞冻存与复苏的关键技术要点是什么？

答：冻存需逐步降温（-4℃/分钟至-80℃）、使用保护剂（DMSO）；复苏需快速融化、避免剧烈晃动、立即置于37℃培养。