微生物常见检测方法总结.pdfVIP

微生物的检测，无论在理论研究还是在生产实践中都具有重要的意义。常见的检测

方法有：生量测定法,微生物计数法、生理指标法和商业化快速微生物检测等，

本文主要介绍常用的检测方法的的原理，应用范围和优缺点。

微生物生意味着原生质含量的增加，所以测定的方法也都直接或间接的以次为根

据，而测定繁殖则都要建立在计数这一基础上。微生物生的衡量，可以从其重

量，体积，密度，浓度，做指标来进行衡量。

生量测定法

1.体积测■法：又称测菌丝浓度法。

原理：通过测定一定体积培养液中所含菌丝的量来反映微生物的生状况。

菌丝浓度测定法是大规模工业发酵生产上微生物生的一个重要监测指标。这种方

法比较粗放，简便，快速，但需要设定一致的处理条件，否则偏差很大，由于离心

沉淀物中夹杂有一些固体营养物，结果会有一定偏差。

2.称干重法

原理：利用离心或过滤法测定。一般干重为湿重的10-20%。称干重发法较为烦

琐，通常获取的微生物产品为菌体时，常采用这种方法，如活性干酵母

(activitydryyeast.ADY)，一些以微生物菌体为活性物质的饲料和肥料。

3.比浊法

原理：微生物的生弓I起培养物混浊度的增高。通过紫外分光光度计测定一定波

下的吸光值，判断微生物的生状况。该法主要用于发酵工业菌体生监测。

4.菌丝度测量法

方法：对于丝状真菌和一些放线菌，可以在培养基上测定一定时间内菌丝生的

度。

微生物计数法

1.血球计数板法

这种方法简便，直观，快捷，但只适宜于单细胞状态的微生物或丝状微生物所产生

的狗子进行计数，并且所得结果是包括死细胞在内的总菌数。

2.染色计数法

为了弥补一些微生物在油镜下不易观察计数，而直接用血球计数板法又无法区分死

细胞和活细胞的不足，人们发明了染色计数法。

3.比例计数法

将已知颗粒(如霉菌胞子或红细胞)浓度的液体与一待测细胞浓度的菌液按一定比

例均匀混合，在显微镜视野中数出各自的数目，即可得未知菌液的细胞浓度。

4.液体稀释法

对未知菌样做连续十倍列稀释，根据估计数，从最适宜的三个连续的10倍稀释

液中各取5毫升试样，接种1毫升到3组共15只装培养液的试管中，经培养后记

录每个稀释度出现生长的试管数，然后查最大或然数表MPN(mostprobably

number)得出菌样的含菌数，根据样品稀释倍数计算出活菌含量。该法常用于食品

中微生物的检测，例如饮用水和牛奶的微生物限量检查。

5.平板菌落计数法

这是一种最常用的活菌计数法。但方法比较麻烦，操作者需有熟练的技术。平板菌

落计数法不仅可以得出菌液中活菌的含菌数，而且同时将菌液中的细菌进行了一次

分离培养，获得了单克隆。

6.试剂纸法

在平板计数法的基础上，发展了小型商品化产品以供快速计数用。试剂纸法计数快

捷准确，相比而言避免了平板计数法的人为操作误差。

7.膜过滤法

用特殊的滤膜过滤一定体积的含菌样品，经丫叮橙染色，在紫外显微镜下观察细胞

的荧光，活细胞会发橙色荧光，而死细胞则发绿色荧光。

生理指标法

微生物的生长伴随着一列生理指标发生变化，例如酸碱度，发酵液中的含氮量，

含糖量，产气量等，与生长量相平行的生理指标很多，它们可作为生长测定的相对

值。

1.测定含氮量

大多数细菌的含氮量为干重的12.5%,酵母为7.5%,霉菌为6.0%。根据含氮量X

6.25,即可测定粗蛋白的含量。含氮量的测定方法有很多，如用硫酸，过氯酸，碘

酸，磷酸等消化法和Dumas测氮气法。

2.测定含碳量

将少量（干重0.2-2.0mg）生物材料混入1毫升水或无机缓冲液中，用2毫升2%

的K2Cr207溶液在1000C下加热30分钟后却。加水稀释至5毫升，在580nm的

波长下读取吸光光度值，即可推算出生长量。需用试剂做空白对照，用标准样品做

标准曲线。

3.还原糖测定法

还原糖通常是指单糖或寡糖，可以被微生物直接利用，通过还原糖的测定可间接反

映微生物的生长状况，常用于大