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基于新型传感技术的苹果酸生物传感器制备及根系分泌物检测应用研究

一、引言

1.1研究背景与意义

苹果酸，作为一种重要的有机酸，在植物的生理活动中扮演着不可或缺的角色。在植物的物质与能量代谢进程里，苹果酸占据着关键地位。它是三羧酸循环（TCA循环）的重要中间产物，连接着多个代谢途径，不仅参与呼吸作用，为植物生命活动提供能量，还与光合作用密切相关，在C4植物和景天酸代谢（CAM）植物的碳固定过程中发挥关键作用。在C4植物中，叶肉细胞质中的磷酸烯醇式丙酮酸（PEP）羧化酶固定CO?产生草酰乙酸，后者在叶绿体中NADP专一的苹果酸脱氢酶催化下形成苹果酸，苹果酸随后运输到鞘细胞释放CO?，参与卡尔文循环；CAM植物则利用PEP羧化酶和NADH苹果酸脱氢酶在夜间形成苹果酸并储存，白天再释放CO?用于光合作用。

植物根系分泌物是植物与土壤环境进行物质交换和信息传递的重要媒介，而苹果酸是根系分泌物的重要组成部分。根系分泌的苹果酸在植物营养吸收方面发挥着关键作用。在面对磷、铁、铝等营养元素缺乏的胁迫时，植物会通过增加苹果酸的分泌来应对。苹果酸能够与土壤中的难溶性磷结合，将其转化为植物可吸收的有效态磷，从而提高植物对磷的吸收效率。在酸性土壤中，铝离子对植物具有毒害作用，苹果酸可以与铝离子络合，降低其毒性，减轻铝对植物的伤害，增强植物的抗逆性。苹果酸还可以作为信号分子，调节土壤微生物的群落结构和功能，促进有益微生物的生长和繁殖，抑制病原菌的侵染，对维持植物根际微生态系统的平衡具有重要意义。

准确测定根系分泌物中的苹果酸含量，对于深入研究植物营养吸收机制、揭示植物与土壤微生物的互作关系以及评估植物对环境胁迫的响应具有重要意义，在植物营养研究领域，通过监测根系分泌物中苹果酸含量的变化，可以了解植物对不同养分的需求和吸收策略，为合理施肥提供科学依据。在环境科学领域，研究苹果酸在土壤中的迁移转化规律以及对土壤理化性质的影响，有助于评估土壤质量和生态环境健康状况。目前传统的苹果酸检测方法存在诸多局限性，如高效液相色谱法（HPLC）、气相色谱法（GC）、离子色谱法（IC）等，这些方法不仅对样品前处理要求严格、操作复杂、分析时间长，而且仪器设备昂贵，难以满足快速、实时、原位检测的需求。因此，开发一种快速、准确、灵敏且操作简便的苹果酸检测方法迫在眉睫，生物传感器技术的出现为解决这一问题提供了新的途径。

1.2国内外研究现状

在苹果酸生物传感器制备方面，国内外学者进行了大量研究并取得了一定进展。早期的研究主要集中在酶电极型生物传感器，通过将苹果酸脱氢酶（MDH）固定在电极表面，利用酶对苹果酸的特异性催化作用来实现检测。M.Gamellaa等人制备的苹果酸脱氢酶电化学生物传感器，用于监测葡萄酒酿造过程中的苹果酸-乳酸发酵过程，展现出一定的应用潜力。然而，这类传感器存在酶易失活、稳定性差等问题。为解决这些问题，研究人员开始探索新的固定化技术和材料。有学者利用壳聚糖、碳纳米管等新型材料对酶进行固定化，提高了酶的稳定性和活性，拓宽了传感器的线性检测范围。也有研究尝试将多种酶共固定，构建双酶或多酶生物传感器，以提高检测的特异性和灵敏度。有团队研发的共固定NADH氧化酶（NOX）和MDH的苹果酸传感电极，有效克服了单酶传感器检测范围窄的缺陷，为高浓度苹果酸的检测提供了新方法。

在根系分泌物苹果酸测定方面，传统检测方法如HPLC、GC、IC、液相色谱-质谱联用技术（LC-MS）、毛细管电泳技术（CE）等虽能实现准确测定，但存在样品前处理复杂、分析时间长、成本高等问题，难以满足对根系分泌物实时、原位检测的需求。随着生物传感器技术的发展，其在根系分泌物苹果酸测定中的应用逐渐受到关注。已有研究将制备的苹果酸生物传感器应用于植物根系分泌物中苹果酸含量的检测，初步证明了生物传感器在该领域的可行性。现有研究在传感器的稳定性、抗干扰能力以及实际应用的便捷性等方面仍有待提高，对于不同植物种类、不同生长环境下根系分泌物中苹果酸的动态变化监测，还缺乏系统深入的研究。

1.3研究目的与创新点

本研究旨在制备一种高性能的苹果酸生物传感器，并将其应用于根系分泌物中苹果酸的准确测定，为植物营养研究、环境科学等领域提供一种快速、灵敏、便捷的检测工具。

本研究的创新点主要体现在以下几个方面：一是在传感器性能方面，通过筛选和优化新型固定化材料与技术，提高苹果酸生物传感器的稳定性、灵敏度和抗干扰能力，有望突破现有传感器在检测性能上的局限；二是在检测方法上，结合微流控技术和原位检测技术，实现对根系分泌物中苹果酸的实时、原位、无损检测，克服传统检测方法的繁琐操作和对样品的破坏，为研究植物根系生理活动提供更真实、准确的数据；三是在应用研究中，