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2025年核酸检测方法试题及答案

一、单项选择题（每题2分，共40分）

1.以下哪种核酸检测技术属于基于扩增的方法？

A.核酸杂交技术

B.基因测序技术

C.聚合酶链式反应（PCR）技术

D.原位杂交技术

答案：C。聚合酶链式反应（PCR）技术是典型的基于核酸扩增的检测方法，它可以在体外大量扩增特定的核酸片段，从而提高检测的灵敏度。核酸杂交技术主要是利用核酸分子的互补性进行检测，不涉及核酸的扩增；基因测序技术是对核酸序列进行测定，并非专门的扩增方法；原位杂交技术也是基于核酸杂交原理，在组织或细胞原位进行检测，不进行核酸扩增。

2.实时荧光定量PCR技术中，荧光信号的产生与以下哪种物质有关？

A.引物

B.模板

C.荧光染料或探针

D.Taq酶

答案：C。在实时荧光定量PCR中，荧光信号的产生主要与荧光染料（如SYBRGreen）或荧光探针（如TaqMan探针）有关。荧光染料可以与双链DNA结合，在PCR扩增过程中随着双链DNA的增加而发出荧光；荧光探针则是根据目标序列设计的，在PCR扩增时会被特异性切割或结合，从而产生荧光信号。引物是引导DNA合成的起始序列，模板是待扩增的核酸，Taq酶是催化DNA合成的酶，它们本身并不直接产生荧光信号。

3.核酸提取过程中，常用的裂解液成分不包括以下哪种？

A.蛋白酶K

B.乙醇

C.表面活性剂

D.缓冲盐

答案：B。核酸提取时，裂解液的作用是破坏细胞结构，释放核酸。蛋白酶K可以消化蛋白质，使核酸从蛋白质复合物中释放出来；表面活性剂（如SDS）可以溶解细胞膜和核膜；缓冲盐可以维持溶液的pH值和离子强度，保证裂解过程的稳定性。而乙醇主要用于核酸的沉淀，在裂解液中一般不使用。

4.数字PCR技术与传统PCR技术的主要区别在于？

A.反应体系不同

B.扩增原理不同

C.检测灵敏度不同

D.对模板的要求不同

答案：C。数字PCR技术与传统PCR技术的扩增原理基本相同，都是基于DNA的半保留复制。它们的反应体系也有相似之处，都包含引物、模板、酶等成分。对模板的要求也大致相同。数字PCR技术的主要优势在于其检测灵敏度更高，它可以将反应体系分割成大量的微小反应单元，对每个单元进行单独检测，从而实现对核酸分子的绝对定量，能够检测到低丰度的核酸分子。

5.以下哪种样本类型在核酸检测中相对较难提取到高质量的核酸？

A.血液

B.痰液

C.尿液

D.组织活检样本

答案：B。血液中含有丰富的白细胞等细胞，核酸提取相对容易；尿液中虽然核酸含量较低，但经过适当的处理也可以提取到一定量的核酸；组织活检样本可以通过合适的裂解和提取方法获得高质量的核酸。而痰液中含有大量的黏液、蛋白质和杂质，这些物质会干扰核酸的提取过程，并且黏液会包裹细胞，使得核酸难以释放出来，因此相对较难提取到高质量的核酸。

6.在核酸检测中，为了避免交叉污染，以下操作错误的是？

A.不同样本的操作在不同的区域进行

B.移液器使用后及时更换枪头

C.实验结束后统一清理工作台

D.对实验器材进行严格的消毒处理

答案：C。为了避免交叉污染，不同样本的操作应在不同的区域进行，以防止样本之间的相互污染；移液器使用后及时更换枪头，避免残留的样本污染下一个样本；对实验器材进行严格的消毒处理，可以有效杀灭可能存在的核酸污染。而实验结束后统一清理工作台可能会导致在清理过程中污染其他样本或实验区域，应该在每次操作后及时清理，保持工作区域的清洁。

7.环介导等温扩增技术（LAMP）的特点不包括以下哪项？

A.反应速度快

B.特异性高

C.需要复杂的仪器设备

D.可在等温条件下进行

答案：C。环介导等温扩增技术（LAMP）具有反应速度快的特点，一般在1小时内即可完成扩增反应；它通过设计多对引物，特异性识别目标核酸序列，因此特异性较高；该技术可以在等温条件下进行，不需要像PCR那样进行变温循环。而且LAMP技术不需要复杂的仪器设备，只需要一个恒温装置即可，操作相对简单。

8.核酸检测中，使用的阳性对照样本的作用是？

A.检测实验体系是否正常工作

B.确定样本的浓度

C.评估检测方法的灵敏度

D.排除假阳性结果

答案：A。阳性对照样本是已知含有目标核酸的样本，在核酸检测中加入阳性对照样本，可以验证实验体系（包括试剂、仪器、操作等）是否正常工作。如果阳性对照样本检测结果为阴性，说明实验体系可能存在问题，需要进行排查。阳性对照样本不能用于确定样本的浓度，评估检测方法的灵敏度通常需要使用一系列已知浓度的样本进行检测；排除假阳性结果主要通过设置阴性对照等方法。

9.以下哪种核酸检测方法可以直接测定核酸的序列？