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电镜复习题及答案

考试时间：______分钟总分：______分姓名：______

一、

简述透射电子显微镜（TEM）和扫描电子显微镜（SEM）在基本原理、分辨率、样品要求及应用范围上的主要区别。

二、

电镜样品制备是一个复杂的过程，涉及多个步骤。请简述从生物样品固定到制备成可用于TEM观察的薄片的典型流程，并说明每一步骤的目的。特别指出在样品制备过程中，为什么通常需要将样品干燥，以及常用的干燥方法有哪些？

三、

什么是电子衍射？简述选区电子衍射（SAED）的基本原理，并说明如何通过SAED图谱判断样品是否为晶体，以及如何大致确定晶体的晶面指数。

四、

在透射电镜图像中，衬度是如何产生的？请至少列举两种主要的衬度机制，并简述其基本原理。

五、

假设你需要观察一株植物叶片细胞内的叶绿体超微结构，并希望获得清晰的细胞器轮廓和内部细节。请设计一个简要的TEM样品制备方案，包括关键的步骤和注意事项。

六、

简述扫描电镜（SEM）成像过程中，二次电子信号和背散射电子信号的来源、产生机制以及它们在成像衬度、分辨率和样品应用方面的主要差异。

七、

请解释什么是电子显微镜的分辨率，并简述影响TEM分辨率的主要因素有哪些。现代高分辨率透射电镜（HRTEM）可以达到的分辨率大约是多少？这个分辨率可以用来观察哪些尺度的结构？

八、

描述一下你在电镜室观察到的某种典型样品（如微生物、细胞、矿物、材料等）的SEM或TEM图像特征。请根据图像可能呈现的衬度或结构，推测样品中可能存在的微观结构或成分，并说明你的推断依据。

试卷答案

一、

TEM和SEM的主要区别：

*原理：TEM利用透射电子束与样品相互作用成像，SEM利用扫描电子束与样品表面相互作用产生二次电子或背散射电子进行成像。

*分辨率：TEM通常远高于SEM，可达0.1纳米量级，SEM一般在几纳米量级。

*样品要求：TEM需要制备超薄样品（几纳米厚），通常需要导电处理；SEM样品制备相对简单，可以直接观察块状、粉末等，但通常也需要导电处理或喷金。

*成像层面：TEM主要观察样品的二维截面或投影；SEM主要观察样品表面的三维形貌。

*应用范围：TEM更适用于观察晶体结构、原子排列、精细内部结构；SEM更适用于观察样品表面的形貌、纹理、成分分布等。

二、

TEM样品制备流程及目的：

1.固定：使用化学固定液（如甲醛、戊二醛）浸泡样品，通过化学交联固定细胞或组织的超微结构，防止其自溶和变形。目的：固定生物大分子和细胞结构。

2.渗透：将固定后的样品放入逐渐增高的浓度梯度渗透剂（如丙酮）中，使固定液置换出细胞内的水分，并将渗透剂充满细胞内外空间。目的：使样品脱水并使embedding液渗透均匀。

3.脱水：使用梯度浓度丙酮依次脱水，逐步去除样品中的水分。目的：完全去除样品中的水分，为后续包埋做准备。

4.干燥：将脱水后的样品进行干燥处理。目的：去除所有水分。常用方法：临界点干燥（避免产生气泡和收缩）、冷冻干燥（适用于含水的有机大分子样品）。

5.包埋：将干燥后的样品浸泡在高温下能固化的包埋介质（如环氧树脂）中，并在烘箱或包埋机中加热固化，使样品被坚硬的材料包裹。目的：将样品固定成块状坚硬材料，便于后续切片。

6.切片：使用超薄切片机将包埋块切成厚度约70-90纳米的薄片。目的：获得可供TEM观察的透明薄片。

7.染色：使用重金属盐（如醋酸铀、枸橼酸铅）对切片进行染色，重金属原子能散射电子，增强样品不同区域的衬度。目的：提高样品对电子的散射能力，使细胞内部结构在TEM图像中显现出来。

8.收集：将染色后的切片放置在铜网上，待干燥后即可置于TEM中观察。

三、

电子衍射：

*原理：当高能电子束穿过晶体样品时，会与晶格中的电子发生相互作用，发生散射。这些散射波在空间中相互干涉，当满足布拉格条件时会产生衍射斑点，这些斑点包含了样品晶体结构的周期性信息。通过分析衍射斑点的位置、强度和分布，可以获取关于晶体结构、晶胞参数、晶体取向等信息。

*SAED判断晶体及晶面指数：

*判断晶体：如果电子束穿过样品的不同区域时，都能观察到规律分布的衍射斑点，说明样品具有长程有序的晶体结构。反之，如果只观察到明场像而没有衍射图，或衍射图弥散，则样品可能为非晶体或无定形材料。

*确定晶面指数：根据布拉格定律(nλ=2dsinθ)和衍射斑点在衍射屏上的几何位置（角度），可以计算出入射电子束与样品中特定晶面族之间的夹角（布拉格角θ）。通过比较不同衍射斑点的θ值，可以确定它们分别属于哪些晶面族，从而得到晶面指数（hkl）。

四、

透射电镜图像衬度产生机制：

1.原子序数衬度（