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生物发酵安全培训

目录

CATALOGUE

01

导言与基础

02

安全风险识别

03

操作规程与程序

04

个人防护装备

05

应急响应措施

06

培训效果与维护

PART

01

导言与基础

生物发酵过程概述

生物发酵是通过微生物（如细菌、酵母、霉菌）在特定环境条件下代谢底物，生成目标产物（如抗生素、酶、有机酸）的过程，需严格控制温度、pH、溶氧等参数以优化产量。

微生物代谢与产物形成

包括分批发酵、补料分批发酵和连续发酵，不同工艺适用于不同产物，需根据微生物生长动力学和产物合成特性选择。

发酵工艺类型

发酵过程中需防范杂菌污染和噬菌体感染，涉及培养基灭菌、无菌操作、设备密封性检查等环节，污染可导致产物纯度下降或发酵失败。

污染控制关键点

培训目标与范围

安全操作技能提升

培训涵盖发酵设备规范操作（如发酵罐、离心机）、个人防护装备（PPE）使用及应急处理（如泄漏、火灾），确保人员具备实操能力。

风险评估与管理

学员需掌握发酵车间常见风险（如高压蒸汽、化学品暴露）的识别方法，并学习通过工程控制（通风系统）和行政控制（SOP）降低风险。

跨部门协作意识

强调生产、质检、设备维护部门的协同，确保从菌种制备到下游处理的全程安全，避免因沟通不足导致的操作失误。

国际规范参考

执行《生物安全法》《药品生产质量管理规范》（GMP）中关于菌种保藏、废弃物处理及人员资质的条款，违规可能面临法律责任。

国家强制性规定

企业内控体系

建立涵盖菌种管理、环境监测、批次记录的内部标准，定期审计并更新以适配新技术或法规变动，形成闭环管理。

遵循WHO《生物安全手册》、ISO14698（洁净室微生物控制）等国际标准，确保发酵过程符合全球生物制品生产要求。

法规与标准框架

PART

02

安全风险识别

微生物污染风险

代谢产物毒性

部分微生物可能产生毒素或有害代谢物，需通过菌种筛选和发酵条件优化控制其生成量。

03

开放式发酵系统易受空气中杂菌污染，需定期监测环境微生物负荷，并采用高效空气过滤系统降低风险。

02

环境微生物侵入

菌种交叉污染

发酵过程中不同菌株可能因操作不当导致交叉污染，影响产物纯度和质量，需严格区分无菌操作区域与污染区域。

01

化学品暴露危害

消毒剂残留风险

发酵设备清洁使用的强酸、强碱或氧化剂可能残留，需建立严格的冲洗流程和残留检测标准。

培养基成分刺激

某些氮源（如铵盐）或诱导剂可能对皮肤、呼吸道造成刺激，操作时需佩戴防护手套和口罩。

有机溶剂挥发

提取阶段使用的醇类、酯类溶剂易挥发，需在通风橱中操作并监测作业环境浓度。

设备操作潜在危险

高压灭菌锅爆炸风险

灭菌设备超压运行可能引发物理爆炸，需定期校验安全阀压力表并设置自动泄压装置。

低温冻伤隐患

冷冻干燥机或低温储罐接触不当可能导致皮肤冻伤，操作需穿戴防寒手套并张贴警示标识。

搅拌机械伤害

发酵罐搅拌桨高速运转时可能卷入衣物或工具，需加装联锁防护罩和急停按钮。

PART

03

操作规程与程序

标准操作步骤

根据工艺要求设定温度、pH值、溶氧量及搅拌速度等关键参数，实时监控并记录数据，确保发酵过程稳定可控。

发酵罐参数设定

补料与代谢调控

终止与放罐标准

严格按照无菌操作流程进行菌种活化，使用专用培养基在恒温摇床中扩培至目标浓度，确保菌种活性与纯度符合生产要求。

按阶段添加营养底物或诱导剂，通过在线分析仪监测代谢产物浓度，动态调整补料策略以优化产物合成效率。

当发酵液生物量、产物浓度或残糖量达到预设阈值时，立即启动终止程序，完成放罐操作并保留样品用于质量分析。

菌种活化与扩培

设备预处理

发酵结束后彻底排空残液，拆卸可移动部件（如搅拌桨、探头）进行人工刷洗，去除可见残留物及生物膜。

CIP在线清洗

使用高温碱液循环冲洗管道与罐体，辅以超声波震荡清除死角污垢，最后以注射用水冲洗至电导率达标。

灭菌验证

采用湿热灭菌（121℃）或化学消毒剂浸泡，通过生物指示剂测试验证灭菌效果，确保无菌合格率≥99.9%。

环境表面处理

对操作台、地面及辅助设备喷洒食品级消毒剂，作用时间不低于规定时长，并定期轮换消毒剂类型以防耐药性产生。

清洁与消毒协议

使用浮游菌采样器在关键区域（如接种区、灌装线）定点采集空气样本，培养后统计菌落总数并分析优势污染菌种。

用RODAC平板对设备表面、人员手套进行接触印迹培养，评估清洁消毒后表面微生物负荷是否达标。

安装在线粒子计数器实时监测洁净区空气动态等级，超限时自动触发报警并启动应急预案。

每日对工艺用水进行内毒素、TOC及微生物限度检测，确保水质符合药典或食品生产标准要求。

环境监控方法

空气微生物采样

表面接触皿检测

悬浮粒子监测

水质检测

PART

04

个人防护装备

包括N95口罩、半面罩呼吸器及全面罩呼吸器，用于防止吸入有害气体、