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氟金云母磷灰石玻璃陶瓷涂层体外生物学性能研究

摘要

目的：通过体外复合培养实验，探讨氟金云母/磷灰石玻璃陶瓷涂层生物学性能。方法：采用蘸涂法在钛金属表面制备一层氟金云母/磷灰石玻璃陶瓷涂层。将小鼠的成骨细胞（MC3T3-E1）与涂层有氟金云母/磷灰石玻璃陶瓷的钛金属进行体外复合培养。通过光镜，电镜观察细胞生长情况，用酶联免疫仪检测上清液碱性磷酸酶的含量，用流式细胞技术测定细胞增殖情况。结果：成骨细胞在氟金云母/磷灰石涂层表面生长状态良好，成骨细胞可长入涂层孔隙内。随着时间延长，涂层表面细胞越来越多。两组涂层组（F5组和F8组）上清液的碱性磷酸酶含量高于对照组，且F5组高于F8组（P＜0.05）。流式细胞技术检测发现涂层组细胞增殖指数明显高于对照组（P＜0.05）。而涂层组中，F5组要明显高于F8组（P＜0.05）。结论：1.氟金云母/磷灰石涂层具有良好的生物相容性和生物活性，成骨细胞在涂层组生长上优于钛片组。2.涂层组成骨细胞合成碱性磷酸酶较对照组更为活跃，表明氟金云母/磷灰石涂层有促进成骨细胞成熟、分化的作用。3.F5组生物学性能优于F8组。

关键词

氟金云母；磷灰石；玻璃陶瓷涂层；生物学性能

一、引言

口腔种植材料作为口腔修复领域的关键材料，其性能直接影响种植修复的效果和成功率。理想的口腔种植材料应具备良好的生物相容性、生物活性以及合适的力学性能等。氟金云母/磷灰石玻璃陶瓷涂层作为一种新型的口腔种植材料涂层，具有独特的优势。氟金云母玻璃陶瓷具有良好的切削加工性能，随着CAD/CAM技术在玻璃陶瓷加工中的应用，其应用前景更为广阔。而磷灰石相的引入，使其可能具备与人体骨组织形成骨键合的生物活性。

钛及钛合金由于其良好的力学性能和生物相容性，在口腔种植领域应用广泛。然而，单纯的钛金属表面生物活性较低，与骨组织的结合强度有限。在钛金属表面制备氟金云母/磷灰石玻璃陶瓷涂层，有望改善钛金属的表面性能，提高其与骨组织的结合能力，促进骨整合。

目前，对于氟金云母/磷灰石玻璃陶瓷涂层的研究主要集中在材料的制备工艺、微观结构和力学性能等方面，而对其体外生物学性能的系统研究相对较少。深入了解氟金云母/磷灰石玻璃陶瓷涂层的体外生物学性能，对于评估其作为口腔种植材料的可行性具有重要意义。因此，本研究通过体外复合培养实验，旨在探讨氟金云母/磷灰石玻璃陶瓷涂层的生物学性能，为其临床应用提供理论依据。

二、材料与方法

2.1实验材料

钛金属片：纯度≥99.5%，尺寸为10mm×10mm×1mm，表面经打磨、抛光处理。

氟金云母/磷灰石玻璃陶瓷粉末：自制，通过高温熔炼、浇铸后退火得到基础玻璃，再经特殊的热加工/热处理工艺制备而成。

小鼠成骨细胞（MC3T3-E1）：购自中国科学院细胞库。

细胞培养液：α-MEM培养基（含10%胎牛血清、1%青霉素-链霉素双抗），购自Gibco公司。

酶联免疫试剂盒：碱性磷酸酶（ALP）检测试剂盒，购自南京建成生物工程研究所。

流式细胞仪：BDFACSCalibur型流式细胞仪，购自BD公司。

2.2氟金云母/磷灰石玻璃陶瓷涂层的制备

采用蘸涂法在钛金属表面制备氟金云母/磷灰石玻璃陶瓷涂层。将氟金云母/磷灰石玻璃陶瓷粉末与适量的有机溶剂混合，配制成均匀的涂料。将经过预处理的钛金属片浸入涂料中，缓慢提拉，使涂料均匀地涂覆在钛金属片表面。然后将涂覆有涂料的钛金属片放入马弗炉中，按照一定的升温速率和保温时间进行热处理，使涂料中的玻璃陶瓷粉末熔融并与钛金属表面形成牢固的结合。根据玻璃陶瓷粉末中氟金云母和磷灰石的比例不同，制备两组涂层，分别记为F5组（氟金云母：磷灰石=5:5，质量比）和F8组（氟金云母：磷灰石=8:2，质量比）。同时，以未涂层的钛金属片作为对照组。

2.3细胞培养

将小鼠成骨细胞（MC3T3-E1）接种于含α-MEM培养基的培养瓶中，置于37℃、5%CO?培养箱中培养。待细胞融合至80%-90%时，用0.25%胰蛋白酶消化传代。取对数生长期的细胞用于实验。

2.4体外复合培养实验

将制备好的涂层钛金属片和对照组钛金属片分别放入24孔细胞培养板中，每孔加入1mL含5×10?个细胞的α-MEM培养基。将培养板置于37℃、5%CO?培养箱中培养。分别在培养1d、3d、5d时，进行以下检测。

2.5细胞生长情况观察

光镜观察：取出培养板，用PBS缓冲液轻轻冲洗细胞3次，然后加入适量的4%多聚甲醛固定15min。弃去固定液，用PBS缓冲液冲洗3次，加入适量的苏木精-伊红（HE）染液染色5min，水洗