汉滩病毒和汉城病毒双重实时荧光 RT-PCR检测方法DB36T 2206-2025.docxVIP

ICS11.020DB36

CCSC62

江西省地方标准

DB36/T2206—2025

汉滩病毒和汉城病毒双重实时荧光RT-PCR检测方法

Duplexreal-timeRT-PCRdetectionmethodforHantaanvirusandSeoulvirus

2025-12-29发布2026-07-01实施

江西省市场监督管理局发布

I

DB36/T2206—2025

目次

前言 II

1范围 1

2规范性引用文件 1

3术语和定义 1

4缩略语 1

5仪器设备 2

6试剂和材料 2

7生物安全要求 2

8检测步骤 2

9结果判定 3

附录A（规范性）汉滩病毒和汉城病毒检测靶标基因序列 4

附录B（资料性）灭菌PBS溶液的配制 5

附录C（规范性）引物与探针序列 6

附录D（资料性）双重实时荧光RT-PCR检测反应体系和反应条件 7

参考文献 8

II

DB36/T2206—2025

前言

本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本标准的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由江西省卫生健康委员会提出。

本文件由江西省卫生健康标准化技术委员会(JX/TC037)归口。

本文件起草单位：江西省疾病预防控制中心、宜春市疾病预防控制中心、南昌市疾病预防控制中心、上饶市疾病预防控制中心、高安市人民医院、高安市疾病预防控制中心、丰城市疾病预防控制中心。

本文件主要起草人：刘师文、李健雄、施勇、徐刚、张艳妮、张红波、邱伟华、肖芳、钱科、尤晨、刘晓庆、雷锦辉、陈勇、丁欣悦、周珺、肖大瑾、冉鑫、吴杨博文、王倩、熊英。

DB36/T2206—2025

1

汉滩病毒和汉城病毒双重实时荧光RT-PCR检测方法

1范围

本文件规定了汉滩病毒和汉城病毒双重实时荧光RT-PCR检测的仪器设备、试剂和材料、生物安全要求、检测步骤和结果判定等内容。

本文件适用于啮齿类动物汉滩病毒和汉城病毒的双重实时荧光RT-PCR检测。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件，不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB19489实验室生物安全通用要求

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

汉滩病毒Hantaanvirus(HTNV)

引起肾综合征出血热的病原体之一，是一种有包膜分节段的负链RNA病毒，自然宿主主要为黑线姬鼠。

3.2

汉城病毒Seoulvirus(SEOV)

引起肾综合征出血热的病原体之一，是一种有包膜分节段的负链RNA病毒，自然宿主主要为褐家鼠。3.3

实时荧光RT-PCRreal-timeRT-PCR

在常规逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)的基础上，加入一条特异性探针，探针两端分别标记一个荧光报告基团和一个荧光淬灭基团。当探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；在聚合酶链式反应(PCR)过程中，Taq酶的5→3外切酶活性将探针酶切降解，使荧光报告基团和荧光淬灭基团分离，淬灭作用消失，荧光信号产生并被检测仪器接收。利用荧光信号累积实现实时在线监测整个PCR反应过程，结合相应的软件可以对结果进行定性和定量分析。

4缩略语

DB36/T2206—2025

2

下列缩略语适用于本文件。

RNA：核糖核酸(ribonucleicacid)

PBS：磷酸盐缓冲液(phosphatebufferedsaline)

RT-PCR：逆转录聚合酶链式反应(reversetranscription-polymerasechainreaction)

PCR：聚合酶链式反应(polymerasechainreaction)

Ct值：实时荧光RT-PCR反应中每个反应管内的荧光信号达到设定的阈值时所经历的循环数(cyclethresholdvalue)

FAM：羧基荧光素（Carboxyfluor