CN112710769A 生物样品中四氢大麻酚（thc）的含量测定方法 （安徽瑞达健康产业有限公司）.docxVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利申请

(43)申请公

(10)申请公布号CN112710769A布日2021.04.27

(21)申请号202011456191.4

(22)申请日2020.12.10

(71)申请人安徽瑞达健康产业有限公司

地址230000安徽省合肥市高新区创新大

道2800号创新产业园二期H2栋174室

(72)发明人高飞燕朱宜玲

(74)专利代理机构合肥方舟知识产权代理事务所(普通合伙)34158

代理人朱荣

(51)Int.CI.

GO1N30/88(2006.01)

权利要求书2页说明书7页附图3页

(54)发明名称

生物样品中四氢大麻酚(THC)的含量测定方法

(57)摘要

CN112710769A本发明公开了生物样品中四氢大麻酚(THC)的含量测定方法，采用高效液相色谱-串联质谱进行测定，使用Shim-packISTC18色谱柱(2.1*100mm,2um),以甲醇：水=(87:13)为流动相，等度洗脱，流速为0.2ml/min,以电喷雾负离子扫描，多反应检测模式检测。该方法在THC浓度为4.16-4160ng/ml范围内线性相关系数大于0.999。考察了THC的提取回收率为101.03%。本发明测定方法选择性强、灵敏度高、检测快速、重现性好，可用于含THC样品的体内药物分析、

CN112710769A

CN112710769A权利要求书1/2页

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1.生物样品中四氢大麻酚(THC)的含量测定方法，其特征是，该方法采用高效液相色谱-串联质谱进行测定，并且包括以下步骤和测试条件：

(1)储备液的制备：

精密称取适量THC,于容量瓶中，加甲醇溶解、定容、混匀，作为制备标准曲线的储备液及制备质控样品的储备液，于-20℃冰箱中储存；

(2)工作液制备：

用乙腈稀释上述THC储备溶液，分别制得标准曲线样本工作溶液以及质控样本工作溶液，于-20℃冰箱中储存；

(3)标准曲线样本和质控样本的制备：

精密移取100ul不含药的小鼠空白血浆样品5份，分别置于2mlEP管中，各管分别加入乙醇40ul,涡旋30s,再分别加入不同浓度的THC标准曲线样本工作溶液100ul,涡旋30s,分别加水100ul,涡旋30s,加乙腈500u1,涡旋30s,离心10min,8000rpm,取上清液，过滤，得到血浆中一系列浓度的标准曲线；

精密移取100ul不含药的小鼠空白生物样品，血浆、心、肝、脾、肺、肾、脑，各一份，分别置于2mlEP管中，各管分别加入乙醇40ul,涡旋30s,再分别加入同一浓度的THC质控样本工作溶液100ul,涡旋30s,分别加水100ul,涡旋30s,加乙腈500ul,涡旋30s,离心10min,8000rpm,取上清液，过滤，得到不同生物样品的质控样本；

(4)测试样品的处理：

精密移取100ul含药生物样品，血浆、心、肝、脾、肺、肾、脑，各一份，分别置于2mlEP管中，各管分别加入加入乙醇40ul,涡旋30s,加水100ul,涡旋30s,加乙腈600ul,涡旋30s,离心10min,8000rpm,取上清液，过滤，作为测试样品待检测；

(5)利用LCMS8045高效液相-串联质谱系统检测生物样品中THC的含量：

取1ul测试样品注入高效液相色谱-串联质谱仪中，检测样品中THC的色谱峰，并据此计算生物样品中THC的浓度；

液相条件：

色谱柱：Shim-packISTC18(2.1*100mm,2um),流动相：甲醇：水=(87:13),等度洗脱，流速0.2ml/min,柱温：40℃,阀R:0min关(1)、2min开(0)、7min关(1),进样量lul;

质谱条件：

离子源：电喷雾离子源(ESI);负离子方式检测；扫描方式：多反应检测模式；

用于定量分析的离子对：m/z313.40191.20;

雾化器流量：3L/min;加热器流量：10L/min;接口温度：300℃;DL温度：250℃;

加热块温度：400℃;干燥器流量：10L/min;接口电压：调谐电压；

(6)生物样品中THC的含量测定结果计算：

对THC标准曲线的理论浓度和响应值进行线性回归，权重因子为1/C2,得到线性方程，通过线性方程计算生物样品中THC的浓度