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牡丹PsSVP基因克隆与功能解析：开启花期调控新视角

一、引言

1.1研究背景与目的

牡丹（PaeoniasuffruticosaAndr.）作为芍药科芍药属的落叶灌木，是原产于中国的特有名贵花卉，有着“花中之王”的美誉。牡丹不仅具有极高的观赏价值，其文化价值也极为深厚，被赋予了盛世太平、国家兴旺、富贵吉祥等象征意义。经过长期的人工培育，牡丹形成了众多各具特色的栽培品种，其花大色艳、花姿卓越，花色丰富多样，涵盖了白、红、紫、黑、蓝、黄、粉、绿和复色等九大色系。在观赏花卉领域，牡丹独特的魅力使其成为佼佼者，深受人们的喜爱与推崇。然而，牡丹自然花期较短，一朵花的花期仅为3-5天，单株花期为6-10天，群体花期也只有7-15天。这一特性限制了人们对牡丹的观赏时间，难以满足市场对牡丹全年观赏的需求，因此，牡丹的促成栽培成为盆花和切花生产的重要形式之一。

牡丹的生物学特性决定了其必须经历内休眠这一特殊的生命过程才能正常开花展叶。花芽休眠是植物在长期进化过程中形成的一种适应环境变化的机制，它使得植物能够在不利的环境条件下保持生长停滞，以确保在适宜的条件下进行生长和繁殖。对于牡丹而言，内休眠是其生长发育过程中的一个关键阶段，解除花芽休眠则成为牡丹促成栽培的重要内容和关键技术之一。

植物芽休眠的解除过程涉及新陈代谢、激素调控、营养物质合成及转运、细胞信号转导、细胞分裂分化等多个方面，是多基因共同作用的结果。牡丹花芽的休眠属于典型的内休眠，尽管近年来高通量分析技术的应用使全基因组范围内分析休眠解除相关基因和相关代谢活动成为可能，科学家通过SSH、基因芯片、Macroarray、2-D电泳等技术筛选、克隆了大量差异表达基因及蛋白，但目前对于牡丹内休眠调控的分子机理仍知之甚少。

类SVP基因属于MADS-box基因家族，具有高度保守的MADS-box结构域和半保守的能形成卷曲螺旋的K区，在植物中广泛存在。已有研究表明，SVP基因不仅参与花器官发育的调控，还在开花时间的调控中发挥着关键作用，通过调控开花促进基因和开花抑制基因的表达显著影响开花时间早晚。例如，在拟南芥中，SVP基因与FLC等基因相互作用，共同调控开花时间，当SVP基因表达受到抑制时，植物开花时间提前。在荔枝中，LcSVP9基因的过表达导致拟南芥的开花时间推迟，且LcSVP9重组蛋白可与LcFT1启动子的特定基序结合，对LcFT1具有转录抑制作用，从而影响荔枝的开花时间。然而，关于牡丹中PsSVP基因的功能及作用机制，目前尚未有深入的研究报道。

本研究旨在克隆牡丹中的PsSVP基因，并对其功能进行分析，深入了解PsSVP基因在牡丹生长发育过程中的作用机制，特别是其在花芽休眠解除和花期调控中的功能。通过对PsSVP基因的研究，为揭示牡丹内休眠调控的分子机理提供理论依据，为牡丹的花期调控提供新的技术手段和基因资源，从而推动牡丹产业的发展，满足市场对牡丹的观赏需求。同时，本研究也有助于丰富植物基因功能研究的理论体系，为其他植物的花期调控和生长发育研究提供参考。

1.2国内外研究现状

在牡丹研究领域，国内外学者已取得了一系列成果。在分类与系统发育方面，牡丹的分类研究经历了漫长过程，国内方文培率先对牡丹种类进行研究，将牡丹组植物归为肉质花盘和革质花盘2个亚组。《FloraofChina》在2001年对牡丹组进行修订，收录8个种。随着研究深入，李嘉珏提出9种4亚种1杂交种的分类方案，HONG等提出9种2亚种1杂交种的方案。目前，矮牡丹、卵叶牡丹、凤丹、紫斑牡丹、四川牡丹、大花黄牡丹的分类地位较为明确，但滇牡丹的分类地位因缺乏分子证据尚未统一。

在基因组学研究方面，2022年上海辰山植物园联合华大基因成功破解凤丹牡丹高质量染色体水平的基因组遗传密码。研究表明，凤丹牡丹基因组约12.28Gb，大部分功能基因可正常表达转录，大量逆转录转座子插入基因间区形成超大染色体。同时，明确了牡丹在核心双子叶植物基部虎耳草目的系统位置，约出现在109百万年前。全基因组关联分析揭示了牡丹种子高效积累不饱和脂肪酸的机制，鉴定出多个候选油脂合成基因。还发现花发育A类基因AP1的异位表达和C类基因AG在部分雄蕊中的表达减少可能有助于雄蕊瓣化。2023年，中科院植物所通过全基因组鉴定、转录组和关联分析，揭示了HSP20基因家族对牡丹花器官数量变异的遗传基础，为高产优质牡丹分子育种提供帮助。

在花色呈色机制研究上，青岛农业大学郝青课题组以绿牡丹‘绿幕隐玉’为对象，发现其花朵初开期呈绿色，后转变为淡粉色。