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细胞培养超净台的使用流程

汇报人：XXX

2025-X-X

目录

1.超净台准备

2.操作流程

3.细胞接种

4.细胞培养

5.超净台清洁与维护

6.常见问题及处理

7.安全注意事项

01

超净台准备

环境准备

温湿度调控

确保超净台内温度控制在22-25℃，相对湿度在40%-60%。使用温湿度计实时监测，保持环境稳定。

空气净化

超净台应置于通风良好的区域，避免直接暴露在空气流动中。使用高效空气过滤器（HEPA）确保空气洁净度达到100级。

清洁度要求

操作前对超净台进行彻底清洁，使用75%乙醇消毒，确保无尘、无微生物污染。定期（每周至少一次）进行彻底清洁和消毒。

超净台清洁与消毒

消毒剂选择

选择合适的消毒剂，如75%乙醇、1%过氧乙酸或2%次氯酸钠溶液。确保消毒剂浓度准确，避免对细胞造成伤害。

清洁步骤

先用湿布擦拭台面，再用75%乙醇擦拭，确保彻底清洁。对于不易清洁的区域，可使用软毛刷轻轻刷洗。

消毒程序

关闭超净台，将消毒剂喷洒至整个工作区域，保持作用30分钟以上，确保消毒效果。消毒后，用无菌水擦拭去除残留消毒剂。

设备检查

电源检查

确保超净台电源线完好无损，连接稳定。检查电源插座电压是否在220V±10%范围内，符合设备工作要求。

空气净化系统

开启超净台，检查HEPA过滤器是否正常工作，空气过滤效率应达到99.97%以上。若发现过滤效果下降，应及时更换过滤器。

风机与照明

测试超净台的风机是否运行平稳，风速应均匀分布。检查照明系统是否正常，提供足够亮度，便于操作。

02

操作流程

穿戴无菌操作服

选择合适型号

根据操作需求选择合适的无菌操作服，如连体服或分体服。确保服装材质透气、舒适，减少操作时的不便。

穿戴步骤

穿戴前先洗手，并使用消毒液消毒双手。穿上无菌操作服，注意避免触碰服装外部，确保无菌状态。

注意事项

穿戴过程中避免触碰面部、头发等，保持操作服整洁。操作结束后，脱下操作服，避免污染，并按照规定处理。

开启超净台

开启顺序

首先开启超净台外部的电源开关，然后启动超净台内的风机。确保风机运行平稳后，开启净化系统，等待至少10分钟，使空气过滤净化。

风速调节

根据操作需要调节风速，一般设置在0.3-0.5米/秒。风速过低不利于净化，过高则可能影响操作人员的操作。

状态检查

开启后检查超净台运行状态，确保照明正常，风速稳定，无异常噪音。如发现异常，立即停止使用，查找原因并进行处理。

细胞及试剂准备

细胞复苏

将冷冻细胞从液氮中取出，迅速置于37℃水浴中解冻，解冻后尽快进行细胞接种。复苏过程中避免剧烈摇晃，防止细胞损伤。

试剂准备

所有试剂在使用前均需进行高压灭菌，确保无菌。配制细胞培养基时，严格按比例加入胎牛血清和抗生素，混合均匀。

无菌操作

在超净台中操作细胞和试剂，避免触碰容器口，使用无菌吸管吸取液体。所有操作应在紫外灯照射30分钟后进行，确保环境无菌。

03

细胞接种

细胞接种步骤

接种前准备

接种前确保超净台已开启并运行稳定，细胞复苏至37℃水浴中，试剂准备充分。检查细胞活力，确保细胞状态良好。

细胞计数

使用血球计数板对细胞进行计数，调整细胞密度至1×10^5-5×10^5细胞/毫升。根据培养瓶体积计算所需细胞数量。

接种操作

将细胞悬液缓慢加入培养瓶中，轻轻摇晃混合，避免气泡产生。接种后，将培养瓶置于培养箱中，观察细胞生长情况。

注意事项

避免污染

操作过程中严格遵循无菌操作规程，避免任何可能的污染源。使用无菌工具，避免触碰工作区域外表面。

控制细胞密度

细胞密度过高或过低都会影响细胞生长，因此接种时需精确控制细胞密度，通常控制在1×10^5-5×10^5细胞/毫升范围内。

观察与记录

定期观察细胞生长状态，记录细胞形态、密度和生长曲线。如发现异常，及时调整培养条件或进行进一步分析。

接种后处理

培养条件

接种后，将细胞培养瓶置于37℃、5%CO2的培养箱中，保持适宜的温度和气体环境。定期检查温度和湿度，确保培养条件稳定。

换液与传代

根据细胞生长状态，每隔2-3天进行一次换液，去除代谢废物。当细胞汇合度达到80%以上时，进行细胞传代。

数据记录

详细记录细胞接种、换液、传代等操作时间，以及细胞生长曲线、形态变化等数据，为后续实验提供准确数据支持。

04

细胞培养

培养环境控制

温度调控

细胞培养温度需控制在37℃左右，波动范围应小于±0.5℃。使用培养箱内置温度控制器，实时监测并调整温度。

湿度控制

培养箱内相对湿度应保持在90%-95%之间，使用加湿器维持湿度稳定。湿度对细胞生长至关重要，影响细胞代谢。

气体环境

细胞培养需要5%的CO2和95%的空气环境，使用培养箱内置CO2发生器和气体流量控制器来维持这一比例。

细胞观察与记录

形态观察

定期在显微镜下观察细胞形态，注意细