基因工程药物的制造.pptVIP

第二章基因工程制药

DNA分子中含有特定遗传信息的一段核苷酸序列,是遗传物质的最小功能单位。回顾：基因工程的基础知识一、基因的概念:二、基因工程技术是将目的基因插入载体，拼接、转入新的宿主细胞，构建成工程菌(或细胞），实现遗传物质的重新组合，并使目的基因在工程菌内进行复制和表达的技术。

第二节基因工程药物生产的基本过程

（掌握）

⒈目的基因的克隆⒉构建DNA重组体⒊DNA重组体转入宿主菌⒋构建工程菌⒌工程菌发酵⒍表达产物的分离纯化⒎产品的检验等基因工程药物制药的主要程序上游阶段：下游阶段：

一目的基因的获得一、反转录法反转录法就是分离纯化目的基因的RNA，再反转录成cDNA，然后进行cDNA克隆表达。二、反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）RT-PCR是将以RNA为模板的cDNA合成同PCR结合在一起，该法是mRNA经反转录合成cDNA第一链，在以随机引物、oligo(dT)或基因特异性的引物（GSP）起始协助下，PCR扩增，特异性的合成目的cDNA链（目的基因）。三、化学合成法合成目的基因DNA不同部位的两条链的寡核苷酸短片段，再退火成为两端形成粘性末端的DNA双链片段，然后将这些双链片段按正确的次序进行退火连接成较长的DNA片段，再用连接酶连接成完整的基因。

克隆载体表达载体受体细胞（菌）表达系统：基因工程中用来获得有功能的异源蛋白质的体系

常用表达载体--质粒pBV220的结构

融合表达质粒pBG-2的结构

真核基因在原核细胞中表达载体必须具备条件：⑴载体能够独立复制。⑵应具有灵活的克隆位点和方便的筛选标记，以利于外源基因的克隆鉴定和筛选。⑶应具有很强的启动子，能为大肠杆菌RNA聚合酶所识别。⑷应具有阻遏子，使启动子受到控制，只有当诱导时才能进行转录。⑸应具有很强的终止子，只转录克隆的基因，所产生的mRNA较为稳定。⑹所产生的mRNA必须具有翻译的起始信号AUG和SD序列，以便转录后顺利翻译。

1.分批培养2.补料分批培养3.连续培养4.透析培养5.固定化培养三工程菌的培养

发酵液细胞分离胞内产物胞外产物细胞破碎固液分离浓缩初步分离高度纯化制剂产品包含体细胞碎片分离变性复性四基因工程药物的分离纯化

五基因工程药物的质量控制一、生物材料的质量控制二、培养过程的质量控制三、纯化过程的质量控制四、目标产品的质量控制五、产品的保存