单元六-微生物测定技术.pptVIP

内容回顾;单元六微生物测定技术;学习目标;目录;第一节测定微生物生长繁殖的方法;概念;在微生物学中把从一个细胞或一群相同的细胞经过培养繁殖而得到的后代,称纯培养。

在微生物学中培养和发酵两个概念是相同。在工业上大规模的进行微生物培养称为微生物发酵。;（一）重量测定法;（二）细胞组分含量测定法;一、测定微生物的生长量;一、测定微生物的生长量;二、测定微生物的细胞数量;;适用范围：个体较大细胞或颗粒，如血球、酵母菌等。不适用于细菌等个体较小的细胞，因为（1）细菌细胞太小，不易沉降；（2）在油镜下看不清网格线，超出油镜工作距离。

特点：快速，准确，对酵母菌可同时测定出芽率，或在菌悬液中加入少量美蓝可以区分死活细胞。;2.电子计数器法

方法：在计数器中放有电解质及两个电极，将电极一端放入带微孔的小管，通电抽真空，使含有菌体的电解质从小孔进入管内。当细胞通过小孔时，电阻增大，电阻增大会引起脉冲变化，则每个细胞通过时均被记录下来。因样品的体积已知，故可以计算菌体的浓度，同时菌体的大小与电阻的大小成正比。

该方法方便、快捷，但不能测定含有颗粒的菌液，对链状和丝状菌无效。;3、比浊法（比色发）;二、测定微生物的细胞数量;;;3.薄膜过滤计数法;第二节微生物的生长规律;由于微生物细胞极其微小，研究其个体生长存在着技术上的困难。

为了研究细胞数量和质量的增加，一般采用群体生长情况来反映个体的生长。

微生物群体生长是有一定规律。

群体的生长规律对生产实践有指导意义。;一、无分支单细胞微生物生长规律;图中表示的是一个细胞经过若干代分裂后的情况。

从图可见，每经过一个代时，细胞数目就增加一倍，呈指数增加，因而被称为指数生长，这就是单细胞群体生长的特征。;以细菌为例介绍单细胞微生物群体生长规律，其结论也基本适用于酵母菌。

生长曲线代表了细菌在新的环境中从开始生长、分裂直至死亡的整个动态变化过程。

每种细菌都有各自的典型生长曲线，但它们的生长过程却有着共同的规律性。一般可以将生长曲线划分为四个时期。;生长曲线：

把少???的细菌接种到合适的液体培养基中，在适宜的条件下培养，定时取样测定单位体积的细胞数，并绘制所得的曲线：以细菌细胞数目的对数作纵坐标，以培养时间为横坐标，得出细菌在生长过程中的曲线图。

根据生长曲线的变化规律，可分为延迟期、对数生长期、稳定期、衰亡期四个阶段。;延滞期对数生长期稳定期衰亡期

单细胞微生物的典型生长曲线;;将少量单细胞的纯培养，接种到一恒定容积的新鲜液体培养基中，在适宜条件下培养，每隔一定时间取样，测菌细胞数目。以培养时间为横坐标，以细菌增长数目的对数为纵坐标，绘制所得的曲线。;1.延迟期

又称为调整期、停滞期、调整期、适应期。

微生物延迟期的长短以细菌、酵母较短，霉菌次之，放线菌最长。

原因：适应新的环境条件，合成新的酶，积累必要的中间产物。;影响延滞期长短的因素;对实践的指导意义：;现象：细胞数目以几何级数增加，其对数与时间呈直线关系。

特点：（1）生长速率常数最大，即代时最短；（2）细胞进行平衡生长，菌体大小、形态、生理特征等比较一致；（3）代谢最旺盛；（4）细胞对理化因素较敏感

影响因素：（1）菌种（2）营养成分（3）营养物浓度（4）培养温度;对实践的指导意义：

①由于此时期的菌种比较健壮，增殖噬菌体的最适菌龄；生产上用作接种的最佳菌龄；

②发酵工业上尽量延长该期，以达到较高的菌体密度；

③食品工业上尽量使有害微生物不能进入此期；

④是生理代谢及遗传研究或进行染色、形态观察等的良好材料。;3.稳定期;产生原因：

营养物尤其是生长限制因子的耗尽；

营养物的比例失调，如碳氮比不合适；

有害代谢废物的积累（酸、醇、毒素等）；

物化条件（pH、氧化还原势等）不合适。;对实践的指导意义：

（1）发酵生产形成的重要时期（抗生素、氨基酸等），生产上应尽量延长此期，提高产量，措施如下：

补充营养物质（补料即流加）

调pH

调整温度

（2）稳定期细胞数目及产物积累达到最高。

;4.衰亡期;次级代谢产物与微生物的生存、生长和繁殖无关。次级代谢产物的形成往往与微生物细胞的形成过程不同步。在分批培养中，它们的形成高峰往往在微生物生长稳定期的后期或衰亡期。;二、丝状微生物生长规律;解决问题