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高产γ-氨基丁酸乳酸菌的筛选、鉴定、条件优化及谷氨酸脱羧酶基因克隆研究

一、引言

1.1γ-氨基丁酸概述

γ-氨基丁酸（γ-Aminobutyricacid，简称GABA），化学名称为4-氨基丁酸，是一种天然存在的非蛋白质氨基酸，化学式为C_4H_9NO_2，分子质量为103.1。其在常温常压下呈现为白色结晶体粉末状固体，无旋光性，略带有微臭且易潮解，熔点处于195至204℃之间，当温度高于熔点时会分解为水和吡咯烷酮，能与水混溶，微溶于乙醇、丙酮，不溶于苯、乙醚。在化学性质方面，γ-氨基丁酸属于两性离子，羧基的pKa值（酸度系数）为4.03，氨基的pKa为10.56，等电点（pI值）为7.30。

γ-氨基丁酸在生物体内扮演着抑制性神经递质的关键角色，对神经系统功能调节起着至关重要的作用。当人体摄入γ-氨基丁酸后，它能够作用于神经元，通过与相应的受体结合，打开氯离子通道，使得氯离子内流，进而引起神经元膜电位的超极化，降低神经元的兴奋性，从而产生一系列的生理调节效果。

γ-氨基丁酸具有丰富的生理功能。在神经系统调节方面，它能够安抚神经系统，减少焦虑和紧张情绪，有效缓解人们在生活和工作中的压力。例如，在面对高压力环境时，补充γ-氨基丁酸可以帮助个体保持平静和放松的状态。同时，γ-氨基丁酸对睡眠调节也有显著作用，充足的γ-氨基丁酸能够增强人体的舒缓能力，使得身体更容易放松并进入睡眠状态，有助于改善睡眠质量，对于失眠人群具有潜在的改善作用。在血压调节方面，γ-氨基丁酸可以作用于血管平滑肌，使其舒张，进而降低血压，为高血压患者提供了一种潜在的非药物治疗途径。此外，γ-氨基丁酸还在促进神经发育、维持神经元网络平衡等方面发挥着重要作用，对于预防癫痫等神经系统疾病具有积极意义。

由于γ-氨基丁酸具有众多有益的生理功能，其在多个领域展现出了极高的应用价值。在医药领域，γ-氨基丁酸被用于开发治疗多种疾病的药物和保健品。例如，以γ-氨基丁酸为主要成分的保健品，能够帮助人们缓解焦虑、改善睡眠质量，深受消费者欢迎。在食品领域，γ-氨基丁酸常被添加到各种食品和饮料中，作为一种功能性成分，赋予产品减压、助眠等健康功效，满足消费者对健康食品的需求。像一些添加了γ-氨基丁酸的功能性饮料，适合在工作、学习疲劳时饮用，帮助人们缓解压力，提高精神状态。在农业领域，γ-氨基丁酸可以作为植物生长调节剂，增强作物的抗逆性，帮助植物抵御干旱、盐胁迫等不良环境，提高农作物的产量和品质。例如，在干旱地区，使用含有γ-氨基丁酸的植物生长调节剂，可以提高农作物的抗旱能力，保证作物的正常生长。

1.2乳酸菌产γ-氨基丁酸的研究现状

乳酸菌是一类能够利用碳水化合物发酵产生大量乳酸的细菌的统称，其在食品发酵、医药保健等领域具有重要应用。乳酸菌具备发酵产生γ-氨基丁酸的能力，这一特性受到了广泛关注。

在高产菌株筛选方面，科研人员已从多种来源成功筛选出众多具有产γ-氨基丁酸能力的乳酸菌菌株。例如，从传统发酵酸乳中分离鉴定出具有产GABA功能的乳酸菌；从泡菜中筛选出高产γ-氨基丁酸的乳酸菌菌株。这些菌株在不同的发酵条件下展现出各异的产γ-氨基丁酸能力。其中，一些短乳杆菌（Lactobacillusbrevis）菌株表现出较高的产γ-氨基丁酸潜力，在适宜条件下能够积累一定浓度的γ-氨基丁酸。宫璐婵讲师团队从白酒大曲发酵体系中筛选得到产GABA新型的乳酸菌，其中鸟肠球菌GL1在小型5L发酵罐中通过连续添加葡萄糖和底物谷氨酸钠自动控制pH，其GABA产量为206.84g/L，生产效率为2.87g/L/h，在肠球菌中GABA产量最高。

关于发酵条件优化，研究人员针对乳酸菌产γ-氨基丁酸的发酵过程开展了深入研究。在碳源和氮源的选择上，不同的碳源（如葡萄糖、蔗糖等）和氮源（如酵母提取物、蛋白胨等）对乳酸菌的生长和γ-氨基丁酸的合成具有显著影响。通过优化碳氮源的种类和比例，可以有效提高γ-氨基丁酸的产量。发酵温度、pH值和接种量等因素也至关重要。适宜的发酵温度能够保证乳酸菌的最佳生长和代谢活性，从而促进γ-氨基丁酸的合成；pH值的变化会影响乳酸菌体内相关酶的活性，进而影响γ-氨基丁酸的合成途径；合适的接种量可以确保乳酸菌在发酵初期迅速生长繁殖，为γ-氨基丁酸的合成提供充足的菌体数量。有研究表明，在红曲霉与乳酸菌混合发酵GABA的试验中，较为优化的工艺条件为：发酵液中葡萄糖浓度为20g/L；培养温度为32℃；干扰物酵料酵留后添加酵母提取物，使GABA发酵效果更好。

在谷氨酸脱羧酶基因研究方面，谷氨酸脱羧酶（