CN120230785A 新的罗汉果苷生产系统和方法 （可口可乐公司）.docxVIP

(19)国家知识产权局

(12)发明专利申请

(10)申请公布号CN120230785A(43)申请公布日2025.07.01

(21)申请号202510383841.3

(22)申请日2021.03.17

(30)优先权数据

62/990,8022020.03.17US

(62)分案原申请数据

202180035589.72021.03.17

(71)申请人可口可乐公司地址美国佐治亚州

(72)发明人亚历克·J·海耶斯

克里斯多佛·P·梅尔科利亚诺黄腾芳法亚兹·卡齐

(74)专利代理机构北京安信方达知识产权代理有限公司11262

专利代理师牟静芳郑霞

(51)Int.CI.

C12N15/82(2006.01)

C12N15/52(2006.01)

C12N9/02(2006.01)

C12N9/10(2006.01)

C12N9/14(2006.01)

C12N9/22(2006.01)

C12N9/90(2006.01)

A23L2/60(2006.01)

A23L27/30(2016.01)

A01H1/00(2006.01)

A01H1/06(2006.01)

A01H5/00(2018.01)

A01H6/34(2018.01)

权利要求书4页说明书31页序列表(电子公布)附图36页

(54)发明名称

新的罗汉果苷生产系统和方法

(57)摘要

CN120230785A本申请涉及新的罗汉果苷生产系统和方法。本披露提供了生产低热量或无热量的罗汉果苷和基于罗汉果苷的甜味剂的解决方案。通过使用重组基因和植物转化技术，将编码罗汉果苷途径酶的非天然基因引入/实施到植物的基因组中，特此形成转基因植物，其中该植物在其转化前的天然基因组中可能不天然地产生罗汉果苷。这种转基因植物及其后代能够产生非天然罗汉果醇

CN120230785A

CN120230785A权利要求书1/4页

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1.一种用于制备包含基因组转化事件的转基因植物的方法，所述方法包括将植物与包括表达盒的基因组转化事件组合，

其中所述植物是西瓜(Citrulluslanatus),并且其中所述基因组转化事件产生罗汉果苷途径酶葫芦二烯醇合酶(CDS)、角鲨烯环氧酶(SQE)、环氧水解酶(EPH)、细胞色素P450和尿苷-5-二磷酸依赖性葡糖基转移酶(UGT)的非天然表达或浓度，所述表达盒包含：

第一启动子和包括与SEQIDNO.1相比至少95%的同一性的CDS的核苷酸序列，所述第一启动子包括与SEQIDNO.6相比至少95%的同一性，或包括与SEQIDNO.13相比至少95%的同一性；

第二启动子和包括与SEQIDNO.4相比至少95%的同一性的SQE的核苷酸序列，所述第二启动子包括与SEQIDNO.9相比至少95%的同一性，或包括与SEQIDNO.16相比至少95%的同一性；

第三启动子和包括与SEQIDNO.3相比至少95%的同一性的EPH的核苷酸序列，所述第三启动子包括与SEQIDNO.8相比至少95%的同一性，或包括与SEQIDNO.15相比至少95%的同一性；

第四启动子和包括与SEQIDNO.2相比至少95%的同一性的细胞色素P450的核苷酸序列，所述第四启动子包括与SEQIDNO.7相比至少95%的同一性，或包括与SEQIDNO.14相比至少95%的同一性；

第五启动子和包括与SEQIDNO.5相比至少95%的同一性的UGT的核苷酸序列，所述第五启动子包括与SEQIDNO.10相比至少95%的同一性，或包括与SEQIDNO.17相比至少95%的同一性；

其中所述植物和/或其后代和/或种子生物合成地产生非天然罗汉果醇前体、罗汉果醇、罗汉果苷、和/或其代谢物或衍生物。

2.一种用于制备包含非天然罗汉果醇前体和/或罗汉果醇的转基因植物的方法，所述方法包括将植物与包括表达盒的基因组转化事件组合，其中所述植物和/或其后代和/或种子生物合成地产生罗汉果苷、和/或其代谢物或衍生物，其中所述植物是西瓜(Citrulluslanatus),并且所述表达盒包括：

第一启动子和包括与SEQIDNO:1相比至少95%的同一性的CDS的核苷酸序列，所述第一启动子包括与SEQIDN