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蛋白质表达与纯化试卷及答案

考试时间：______分钟总分：______分姓名：______

一、选择题（每题2分，共20分）

1.下列哪种表达系统最适合表达需要内质网和高尔基体进行正确折叠和糖基化的蛋白质？

A.大肠杆菌

B.酵母

C.哺乳动物细胞

D.昆虫细胞

2.在蛋白质纯化中，利用蛋白质特定氨基酸残基（通常是组氨酸）与金属离子结合的层析方法是？

A.离子交换层析

B.凝胶过滤层析

C.亲和层析

D.疏水层析

3.下列哪种试剂通常用于蛋白质的SDS电泳，使其变性并带有负电荷？

A.SDS（十二烷基硫酸钠）

B.尿素

C.β-巯基乙醇

D.甘油

4.蛋白质表达后，如果在细胞内形成不溶性的聚集体，称为？

A.可溶性表达

B.包涵体

C.融合蛋白

D.糖蛋白

5.在蛋白质亲和层析洗脱过程中，为了洗脱目标蛋白，通常需要改变缓冲液中的什么条件？

A.pH值

B.离子强度

C.渗透压

D.以上都是

6.将包涵体中的蛋白质溶解于变性剂后，为了恢复其天然空间结构，需要采用什么策略？

A.直接稀释变性剂

B.快速复性

C.缓慢复性

D.蛋白质纯化

7.下列哪种层析方法主要根据蛋白质分子的大小进行分离？

A.离子交换层析

B.凝胶过滤层析

C.亲和层析

D.疏水层析

8.在蛋白质纯化过程中，SDS通常用于？

A.分离不同大小的蛋白质

B.纯化特定标签蛋白

C.检测蛋白质活性

D.确定蛋白质的氨基酸序列

9.以下哪种情况最适合使用Ni-NTA亲和层析纯化蛋白？

A.蛋白质带有强碱性残基

B.蛋白质带有强酸性残基

C.蛋白质含有组氨酸标签

D.蛋白质是疏水性的

10.蛋白质纯化后，为了评估其功能是否正常，通常需要进行？

A.浓度测定

B.纯度鉴定

C.活性测定

D.等电点测定

二、填空题（每空1分，共15分）

1.蛋白质在原核生物中通常通过______________进行表达。

2.蛋白质纯化中的离子交换层析，依据蛋白质和层析介质上______________的相互作用进行分离。

3.为了防止蛋白质在纯化过程中变性，所有缓冲液通常需要使用______________处理。

4.包涵体中的蛋白质通常以______________状态存在。

5.蛋白质复性过程中，使用______________可以降低蛋白质分子内部的碰撞频率，提高复性效率。

6.亲和层析是一种利用蛋白质与______________之间的高度特异性相互作用进行纯化的方法。

7.蛋白质纯化后，常用的定量方法是使用______________进行测定。

8.在蛋白质纯化方案设计中，首先需要考虑的是目标蛋白的______________和______________。

9.蛋白质纯化过程中，凝胶过滤层析通常用作______________或______________。

三、名词解释（每题3分，共12分）

1.表达载体

2.包涵体

3.亲和层析

4.蛋白质复性

四、简答题（每题5分，共15分）

1.简述在大肠杆菌中诱导表达重组蛋白常用的诱导剂及其作用原理。

2.比较离子交换层析和凝胶过滤层析在分离机制和适用场景上的主要区别。

3.简述蛋白质复性过程中可能遇到的主要挑战。

五、论述题（10分）

设计一个实验方案，用于纯化一个在大肠杆菌中表达的可溶性重组蛋白。该蛋白含有His标签，你需要至少包括表达条件、粗提、纯化（包括具体层析方法和步骤）以及纯度鉴定等关键步骤。

试卷答案

一、选择题

1.C

2.C

3.A

4.B

5.D

6.C

7.B

8.A

9.C

10.C

二、填空题

1.密码子指导

2.电荷

3.乙二胺四乙酸（EDTA）或同等螯合剂

4.变性

5.分步透析或超滤

6.配体

7.紫外分光光度计

8.物理化学性质（如大小、疏水性、电荷点）；生物学特性（如标签、表达量）

9.初步纯化；去除杂质蛋白

三、名词解释

1.表达载体：一种能在宿主细胞中复制并表达外源基因的DNA分子，通常包含启动子、编码基因、终止子等元件。

2.包涵体：指在原核细胞内，由于蛋白质过度表达、环境胁迫等原因，形成的不溶性蛋白质聚集体。

3.亲