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蜂胶中黄酮提取方法及工艺优化研究

摘要

本研究围绕蜂胶中黄酮类化合物的提取展开，系统对比了传统提取法、现代提取法以及新兴提取法的特点与优劣，并通过单因素实验和响应面法对超声波辅助提取工艺进行优化。结果表明，在乙醇浓度70%、料液比1:25（g/mL）、超声时间30min、超声温度50℃的条件下，黄酮提取率最高可达8.23%，为蜂胶黄酮的工业化生产和高效利用提供了理论依据与技术支持。

关键词

蜂胶；黄酮；提取方法；工艺优化；响应面法

一、引言

蜂胶是蜜蜂从植物芽孢或树干上采集的树脂，混入其上颚腺、蜡腺的分泌物加工而成的一种具有芳香气味的胶状固体物，含有丰富的生物活性成分，其中黄酮类化合物是蜂胶中重要的活性物质之一。黄酮类化合物具有抗氧化、抗炎、抗菌、抗肿瘤、降血脂、降血糖等多种生理活性，在医药、食品、化妆品等领域具有广阔的应用前景。因此，如何高效提取蜂胶中的黄酮类化合物成为研究热点。本文将对蜂胶中黄酮的提取方法进行综述，并对提取工艺进行优化，以期为蜂胶黄酮的开发利用提供参考。

二、蜂胶中黄酮的提取方法

2.1传统提取法

2.1.1溶剂提取法

溶剂提取法是利用相似相溶原理，选择合适的溶剂将蜂胶中的黄酮类化合物溶解出来。常用的溶剂有甲醇、乙醇、丙酮等有机溶剂，以及水。乙醇因具有价格低廉、毒性小、提取效率较高等优点，成为最常用的提取溶剂。该方法操作简单，设备要求低，但存在提取时间长、溶剂消耗量大、提取率较低等缺点。

2.1.2热回流提取法

热回流提取法是在溶剂提取法的基础上，通过加热使溶剂回流，提高提取效率。该方法可以连续提取，减少溶剂用量，提高黄酮的提取率，但由于长时间加热，可能会导致黄酮类化合物的结构破坏，影响其生物活性，同时能耗较高，设备投资较大。

2.2现代提取法

2.2.1超声波辅助提取法

超声波辅助提取法是利用超声波的空化效应、机械效应和热效应，破坏蜂胶细胞结构，加速黄酮类化合物向溶剂中的扩散，从而提高提取效率。该方法具有提取时间短、提取率高、能耗低等优点，能够在较低温度下进行提取，减少黄酮类化合物的降解，已成为蜂胶黄酮提取的常用方法之一。

2.2.2微波辅助提取法

微波辅助提取法是利用微波的热效应和非热效应，使蜂胶中的极性分子快速振动和转动，产生热效应，同时破坏细胞结构，促进黄酮类化合物的溶出。该方法提取速度快、效率高，但微波的均匀性可能会影响提取效果，且设备成本较高。

2.2.3超临界流体萃取法

超临界流体萃取法是利用超临界流体（如二氧化碳）具有的特殊性质，在超临界状态下，超临界流体对黄酮类化合物具有良好的溶解能力，通过调节压力和温度，实现黄酮类化合物的提取和分离。该方法具有提取纯度高、无溶剂残留、操作条件温和等优点，但设备投资大，运行成本高，限制了其大规模应用。

2.3新兴提取法

2.3.1酶辅助提取法

酶辅助提取法是利用酶的专一性和高效性，破坏蜂胶细胞壁的结构，使黄酮类化合物更容易释放出来。常用的酶有纤维素酶、果胶酶等。该方法条件温和，对黄酮类化合物的结构破坏小，但酶的成本较高，且需要严格控制酶的用量、作用时间和温度等条件。

2.3.2双水相萃取法

双水相萃取法是利用物质在两个互不相溶的水相中的分配系数不同，实现黄酮类化合物的分离和提取。该方法具有提取速度快、分离效果好、环境友好等优点，但需要选择合适的双水相体系，操作相对复杂。

三、蜂胶中黄酮提取工艺优化

3.1实验材料与仪器

3.1.1实验材料

蜂胶样品购自正规养蜂场，经鉴定为优质蜂胶；芦丁标准品（纯度≥98%）；乙醇、甲醇等化学试剂均为分析纯。

3.1.2实验仪器

电子天平、超声波清洗器、旋转蒸发仪、紫外可见分光光度计、恒温水浴锅等。

3.2实验方法

3.2.1黄酮含量的测定

采用亚硝酸钠-硝酸铝-氢氧化钠比色法测定黄酮含量。以芦丁为标准品，绘制标准曲线，根据吸光度计算样品中黄酮的含量。

3.2.2单因素实验

以乙醇浓度、料液比、超声时间、超声温度为变量，固定其他因素，考察各因素对黄酮提取率的影响。乙醇浓度设置为40%、50%、60%、70%、80%；料液比设置为1:10、1:15、1:20、1:25、1:30（g/mL）；超声时间设置为10min、20min、30min、40min、50min；超声温度设置为30℃、40℃、50℃、60℃、70℃。

3.2.3响应面法优化工艺

在单因素实验的基础上，采用响应面法中的Box-Behnken设计，选取乙醇浓度、料液比、超声时间、超声温度四个因素，每个因素取三个水平，以黄酮提取率为响应值，设计实验方案，通过数据分析确定最佳提取工艺参数。

3.3结果与分析

3.3.1单因素实验结果

乙醇浓度的影响：随着乙醇浓度的增加，黄酮提取率逐渐升高，当乙醇