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急性白血病原代细胞TGF

【摘要】转化生长因子β及其受体的基因突变已被证实在肿瘤形成中具有重要的作用，在许多肿瘤中都发现有TGF-βⅡ型受体表达异常或表达缺失。为了了解急性白血病患者TβR-Ⅱ基因是否存在异常，本研究应用大范围RT-PCR的方法分段扩增急性白血病原代细胞TβR-Ⅱ的编码序列，并结合序列测定技术，分别对6例急性白血病患者以及11例正常人TβR-Ⅱ的编码序列进行突变检测。全部患者经骨髓细胞形态检查符合FAB诊断标准且骨髓原始细胞≥90%。肝素抗凝骨髓4-5ml，分离单个核细胞，用TRIZOL试剂提取总RNA，反转录后行PCR扩增，琼脂糖凝胶电泳分析PCR产物。回收目的片段，克隆到PGEM-T载体，进行序列的测定。结果显示：在检测的病人中有2例病人中存在TβR-Ⅱ的同种型，而此2例病人临床预后不良。结论：部分白血病病人存在TβR-Ⅱ的同种型，而且该同种型可能与预后有关。

【关键词】急性白血病

IdentificationoftheIsoforminTypeⅡReceptorofTransformingGrowthFactor-betainPatientswithAcuteLeukemiaandItsClinicalSignificance

AbstractRecentresearchindicatesthatTGF-βandtypeⅡreceptor(TβR-Ⅱ)playanimportantroleinthepathogenesisoftumor.AhighfrequencyofabnormalitiesinTβR-ⅡhasbeendemonstratedinvariousidentifythemutationofTβR-Ⅱinpatientswithacuteleukemia，thebonemarrowsamplesfrom6patientswithacuteleukemiaand11normalindividualsascontrolweredetectedbylong-rangedetectadeletioninsequenceoftheTβR-Ⅱgene，thePCRproductswereclonedtoTvectorandthenresultsshowedthattherewasexistanceoftheisoformofTβR-Ⅱin2casesoutof6patientswithacutetwopatientshadmorepoorprognosisthanconclusion，therewastheisoformofTβR-Ⅱinpartialpatientswithacuteleukemia，andtheisoformmayberelatedwithprognosis.

Keywordsacuteleukemia;TβR-Ⅱ;isoformreceptor

TGF-β信号转导通路在调节多种细胞的增殖与分化、诱导细胞凋亡等方面具有重要的作用，有研究表明这一通路的紊乱可以导致多种肿瘤的发生［1］。TGF-β受体有3种亚型即TβR-Ⅰ、TβR-Ⅱ和TβR-Ⅲ，其中TβR-Ⅱ和TGF-β具有较高的亲和力，在TGF-β介导的信号转导中起着重要的作用，在许多肿瘤如慢性淋巴细胞白血病、人类表皮T细胞淋巴瘤患者中［2-3］均观察到TβR-Ⅱ表达缺陷。目前对于急性白血病原代细胞是否存在TβR-Ⅱ缺陷未见报道。本研究通过应用大范围RT-PCR技术分段扩增急性白血病原代细胞TβR-Ⅱ的编码序列，进行序列的测定，结合收集的病人的临床资料，初步探讨TGF-βⅡ型受体在急性白血病发病机制中所起的作用。

材料和方法

研究对象

实验组6例，男5例，女1例，平均年龄47±岁，为2003年4月-2004年2月福建医科大学附属协和医院血液科住院或门诊白血病病人，均为初治患者，其中急性淋巴细胞白血病2例，急性非淋巴细胞白血病4例按FAB分型诊断明确，其骨髓原始细胞≥90%。正常对照组11例，男9例，女2例，年龄28±岁，均为健康供髓者。

单个核细胞的制备

采集骨髓，以肝素抗凝。加入37℃温浴的2%甲基纤维素(华美公司产品)至其终浓度为%，混匀，于37℃、5%CO2培养箱中静置30分钟，吸取上层有核细胞层，铺于Ficoll-Hypaque淋巴细胞分离液上层，室温667×g离心20分钟，吸取中间层细