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泛素C末端水解酶-L1活性抑制对tau蛋白降解的影响及机制探究

一、引言

1.1研究背景

蛋白质的合成与降解是维持细胞正常生理功能的关键过程。在真核细胞中，泛素-蛋白酶体降解系统（ubiquitin-proteasomesystem，UPS）是蛋白质降解的主要途径之一，参与细胞内80%以上蛋白质的降解，对维持细胞内蛋白质稳态至关重要。UPS是一个多步骤、需消耗能量的复杂过程，涉及多种酶和蛋白质的参与。其基本过程为：首先，在ATP供能的情况下，泛素活化酶E1通过半胱氨酸残基与泛素C端活化的甘氨酸残基形成硫酯键，激活泛素；然后，活化的泛素从E1转移至泛素结合酶E2的半胱氨酸活性位点上；最后，泛素连接酶E3识别特定的靶蛋白底物，并将结合在E2上的泛素分子连接到底物蛋白的赖氨酸残基上，形成多聚泛素链。带有多聚泛素链标记的蛋白质被26S蛋白酶体识别，进而被降解为小分子的氨基酸，供细胞重新利用。此外，泛素化在蛋白的内吞和外泌作用中还具有目标定位功能。

去泛素化酶（deubiquitinases，DUBs）是一类能够催化泛素与底物蛋白之间共价键水解的酶，在UPS中起着不可或缺的作用。人体内的DUBs大约有100余种，根据位点催化机制的不同，大致可分为四种：泛素特异性蛋白酶（ubiquitin-specificproteases，USPs）、泛素羧基末端水解酶（ubiquitinC-terminalhydrolases，UCHs）、卵巢肿瘤蛋白酶（ovariantumorproteases，OTUs）以及Machado-Joseph病蛋白酶（Machado-Josephdiseaseproteases，MJDs）。DUBs的主要作用是水解与靶蛋白结合的多聚泛素链，将泛素分子从底物蛋白上释放出来，以供泛素分子的循环利用，从而维持游离泛素的合理水平。此外，DUBs还能够调控蛋白质的稳定性、定位、活性以及信号传导等过程，在细胞周期调控、DNA损伤修复、免疫应答、神经退行性疾病等多种生理和病理过程中发挥着关键作用。

泛素C末端水解酶-L1（ubiquitinC-terminalhydrolase-L1，UCH-L1），又称为PGP9.5，是UCHs家族的重要成员之一。UCH-L1由9个外显子编码，共含有223个氨基酸残基，其催化三联体包含90位的半胱氨酸（Cys90）、176位的天冬氨酸（Asp176）和161位的组氨酸（His161），负责其水解酶的活性。UCH-L1具有独特的结构特点，其活性位点位于一个狭窄的裂隙中，周围环绕着环状结构，这种结构赋予了UCH-L1对底物的特异性识别能力，使其主要作用于一些分子量较小的多肽底物，通过裂解C末端76位甘氨酸，将泛素分子从小的多肽底物上释放出来。同时，UCH-L1的表达对神经元和弥漫性神经内分泌系统的细胞及其肿瘤具有高度特异性，在所有神经元中大量存在，约占大脑总蛋白的1-2%，而在其他组织中几乎不存在。

UCH-L1具有多种重要的生物学功能。一方面，它具有去泛素化酶活性，能够水解泛素-蛋白底物中的异肽键，将泛素分子从底物上解离下来，参与蛋白质的降解调控和泛素的循环利用。另一方面，UCH-L1还具有泛素连接酶活性，在特定条件下，能够催化泛素分子之间的连接，形成多聚泛素链。此外，UCH-L1还能够维持单泛素的稳定性，防止其降解，确保细胞内有足够的游离泛素供应。由于UCH-L1在脑内的高表达以及其对蛋白质稳态的重要调节作用，其功能异常与多种神经变性疾病的发生发展密切相关。在阿尔茨海默病（Alzheimersdisease，AD）患者的大脑中，UCH-L1的表达水平和活性均发生明显改变，且与tau蛋白的异常聚集和神经纤维缠结的形成密切相关。在帕金森病（Parkinsonsdisease，PD）中，UCH-L1基因的突变会导致其功能丧失，进而影响多巴胺能神经元的正常功能，促进PD的发生发展。此外，UCH-L1还与亨廷顿病（Huntingtonsdisease，HD）、肌萎缩侧索硬化症（amyotrophiclateralsclerosis，ALS）等神经退行性疾病的发病机制相关。

tau蛋白是一种主要存在于神经元轴突中的微管相关蛋白，其主要功能是与微管蛋白结合，促进微管的组装和稳定，维持神经元的正常形态和功能。在正常生理状态下，tau蛋白通过其C末端的微管结合结构域与微管相互作用，调节微管的动态平衡。然而，在AD等神经退行