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脂多糖（LPS）对非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）大鼠肝纤维化进程的影响及TLR-4/NF-κB信号通路机制研究

一、引言

1.1研究背景

非酒精性脂肪性肝病（Non-AlcoholicFattyLiverDisease，NAFLD）是一种与胰岛素抵抗和遗传易感性密切相关的代谢应激性肝损伤，其病理特征主要表现为肝脏脂肪过度沉积，而无过量饮酒史。近年来，随着全球肥胖率的不断攀升以及生活方式的改变，NAFLD的发病率呈显著上升趋势，目前已成为全球范围内最常见的慢性肝病之一，影响着约25%的全球人口。在中国，NAFLD的患病率也不容小觑，据相关研究统计，其患病率已达到15%-30%，且仍在持续增长。

NAFLD不仅会对肝脏本身造成损害，还与多种代谢性疾病如肥胖、胰岛素抵抗、2型糖尿病、心血管疾病等密切相关，显著增加了患者的死亡风险。更为严峻的是，部分NAFLD患者会逐渐进展为非酒精性脂肪性肝炎（NASH），进而发展为肝纤维化、肝硬化，甚至肝细胞癌（HCC）。一旦疾病进展到肝硬化阶段，患者将面临肝功能衰竭、门静脉高压、腹水、消化道出血等严重并发症，严重威胁患者的生命健康，且治疗难度极大，医疗成本高昂。据统计，NAFLD相关肝硬化患者的5年生存率仅为50%-70%，而发展为HCC后的预后则更差。

肝纤维化是NAFLD病情进展的关键环节，也是导致肝硬化和肝癌的重要病理基础。在NAFLD患者中，约20%-30%的NASH患者会发生肝纤维化，且随着纤维化程度的加重，患者发生肝硬化和肝癌的风险也显著增加。肝纤维化的发生机制极为复杂，涉及多种细胞类型和信号通路的异常激活。肝星状细胞（HSC）的激活被认为是肝纤维化发生的核心事件。正常情况下，HSC处于静止状态，富含维生素A脂滴。然而，当肝脏受到各种损伤因素刺激时，HSC会被激活，发生表型转化，从静止状态转变为活化的肌成纤维细胞样细胞，大量增殖并合成和分泌细胞外基质（ECM），如胶原蛋白、纤连蛋白等，导致ECM在肝脏内过度沉积，从而形成肝纤维化。

脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS）作为革兰氏阴性菌细胞壁的主要成分，在NAFLD的发病机制中扮演着重要角色。肠道菌群失调是NAFLD的重要发病因素之一，当肠道屏障功能受损时，肠道内的LPS会大量进入血液循环，形成内毒素血症。研究表明，LPS可以通过多种途径激活肝脏内的免疫细胞，如库普弗细胞（Kupffercells），使其释放大量的炎症因子，如肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-6（IL-6）等，这些炎症因子不仅会加重肝脏的炎症反应，还能直接刺激HSC的活化，促进肝纤维化的发生发展。

Toll样受体4（Toll-likereceptor4，TLR-4）是LPS的主要识别受体，在LPS介导的信号传导过程中起着关键作用。当LPS进入肝脏后，首先与血浆中的脂多糖结合蛋白（LBP）结合，形成LPS-LBP复合物，然后该复合物与细胞膜表面的CD14分子结合，进而将LPS传递给TLR-4。TLR-4被激活后，通过髓样分化因子88（MyD88）依赖性和非MyD88依赖性两条信号通路向下游传递信号。在MyD88依赖性途径中，TLR-4招募MyD88，MyD88再结合白细胞介素1受体相关激酶（IRAK）家族成员，如IRAK1和IRAK4，激活肿瘤坏死因子受体相关因子6（TRAF6），最终导致丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）和核因子-κB（NF-κB）信号通路的激活。活化的NF-κB可以进入细胞核，与相关基因的启动子区域结合，调控炎症因子、趋化因子等基因的表达，从而引发一系列的炎症反应。而非MyD88依赖性途径则主要通过TIR结构域含接头蛋白（TRIF）激活TBK1和IKK，导致干扰素调节因子3（IRF3）的活化，进而诱导干扰素-β（IFN-β）等干扰素诱导基因（ISGs）的表达。

NF-κB作为一种重要的转录因子，在炎症反应和细胞凋亡等过程中发挥着核心调控作用。在正常情况下，NF-κB与其抑制蛋白IκB结合，以无活性的形式存在于细胞质中。当细胞受到LPS等刺激时，IκB激酶（IKK）被激活，使IκB发生磷酸化，随后被泛素化降解，从而释放出NF-κB。活化的NF-κB迅速进入细胞核，与靶基因启动子区域的κB位点结合，启动相关基因的转录，促进炎症因子、粘附分子等的表达，加剧肝脏的炎症和纤维化进程。