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农杆菌浸润叶片法进行瞬时基因表达分析.pdf

通过农杆菌浸润叶片进行瞬时表达分析

MinWooLee和YinongYang

一种由农杆菌介导的瞬时表达分析方法已被用于体内分析拟南芥植物中的组成型或诱导

型表达。通过简单的将携带适当构建体的农杆菌细胞浸润到拟南芥叶片中，无需使

用昂贵的仪器或复杂的程序，即可在3天内完成瞬时表达分析。农杆菌浸润两天后，可以使

用地塞等化学诱导剂处理拟南芥植物以诱导表达。‑葡萄糖苷酶（GUS）报告基

因的表达可以通过组织化学染色来确定。此外，可以从农杆菌的叶片中提取RNA和蛋白

质，并用于逆转录‑聚合酶链反应（RT‑PCR）、Northern印迹、Western印迹、免疫沉淀

和酶活性测定。

：瞬时表达；农杆菌；农杆菌浸润；GUS染色；地塞诱导表达。

1.引言

瞬时表达分析经常被用作稳定转化的便捷替代方法，因为它可以快速分析表达。

此外，瞬时表达不会受到位置效应的影响，这在稳定转化中经常发生。已经使用了

多种转化方法进行拟南芥中的瞬时表达分析，包括生物轰击(1,2)、PEG介导的

转移和原生电穿孔(3,4)，以及农杆菌介导的转化(5,6)。生物轰击需要昂贵的粒子

枪，并且样本变异往往较大。因此，通常需要一个对照构建（例如，荧光素酶报告）

与测试构建一起共转化以变异。原生转化涉及从叶片叶肉中分离原生的劳

动密集型复杂程序。原生也可能与完整细胞反应不同，可能不适合某些类型的表达分

析。

与生物轰击和原生转化相比，Agrobacterium介导的瞬时表达可以在不使用

昂贵设备（如生物枪或电穿孔）或复杂程序（如原生）的情况下方便地进

行。使用修饰的‑葡萄糖醛酸酶（GUS），该包含一个内含子，瞬时表达测定

首次用于检测T‑从Agrobacteriumtumefaciens到烟草细胞的转移(7)。，几项

研究表明，Agrobacterium介导的瞬时表达是一种高效且多功能的工具，用于研究外源基

因表达(8)、沉默(9,10)、宿主‑病原体相互作用(11–15)、顺式‑元件/反式‑因子相互作

用(16)以及蛋白质‑蛋白质相互作用(17styleid=74

在本章中，我们描述了一种瞬时表达测定方法，通过将携带适当质粒构建体的Agrobacterium细胞

简单地注入完整植物叶片来实现。这些方法

来自：《分子生物学方法》第323卷：《拟南芥协议》第二版编辑：J.Salinas和J.J.

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TransientExpressionAssaybyAgroinfiltrationofLeaves

MinWooLeeandYinongYang

Summary

AnAgrobacterium-mediatedtransientexpressionassayhasbeendescribedforinvivoanalysisof

constitutiveorinduciblegeneexpressioninArabidopsisnts.BysimpleinfiltrationofAgro-

bacteriumcellscarryingappropriategeneconstructsintoArabidopsisleaves,transientexpression