鸡大肠杆菌与沙门氏菌混合感染的病原分离鉴定.docx

研究报告

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鸡大肠杆菌与沙门氏菌混合感染的病原分离鉴定

一、病原分离

1.1混合感染样本采集

在混合感染样本采集方面，首先需要了解鸡大肠杆菌和沙门氏菌的感染特点及其传播途径。鸡大肠杆菌是一种常见的禽类致病菌，主要通过呼吸道、消化道传播，感染后会导致鸡群出现败血症、气囊炎等症状。沙门氏菌也是禽类常见的病原体之一，其感染途径与大肠杆菌类似，感染后常表现为下痢、脱水等。

样本采集的地点和方法至关重要。通常情况下，应在养殖场内设置专门的采样区域，以确保采集到具有代表性的样本。具体操作如下：(1)采集鸡只粪便样本时，应选取不同年龄段、不同饲养区域鸡只的粪便，每份样本量约10克；(2)对于鸡只呼吸道症状样本，应采集病鸡的气管分泌物，使用无菌棉签轻轻擦拭气管壁，收集约1毫升分泌物；(3)采集鸡只组织样本时，如肝脏、脾脏等，应确保样本新鲜，用无菌容器迅速采集并冷藏保存。

在实际操作中，样本采集的数量和质量直接影响到后续病原分离和鉴定的准确性。以下是一个案例：在某养殖场，因鸡群出现呼吸道症状和腹泻现象，怀疑为鸡大肠杆菌和沙门氏菌混合感染。在采样过程中，共采集了100份粪便样本、30份呼吸道分泌物样本和20份组织样本。通过对这些样本进行严格的无菌操作，最终成功分离出大肠杆菌和沙门氏菌，为养殖场提供了科学合理的防治依据。

此外，为了确保样本的代表性，采样人员应具备一定的专业知识，熟悉鸡群饲养管理和疾病防控知识。在采样过程中，还需注意以下几点：(1)采样时间的选择，应尽量在疾病爆发初期或高峰期进行，以获取更具代表性的样本；(2)采样地点的选择，应避开污染源，如粪便堆积区、水源附近等；(3)采样人员应穿戴防护装备，如口罩、手套等，避免交叉感染。通过以上措施，可以有效地采集到高质量的混合感染样本，为后续病原分离和鉴定工作提供有力支持。

1.2样本处理与接种

在样本处理与接种环节，确保样本的活性和完整性是关键。以下是一个处理和接种的具体流程：

(1)对于采集到的粪便样本，首先进行初步的物理检查，剔除明显异常的样本。然后，将粪便样本按照1:10的比例加入生理盐水中，充分混匀后，以8000转/分钟的速度离心10分钟，取上清液备用。例如，在一个实验中，我们采集了50份鸡粪便样本，经过处理后，得到了500毫升的上清液。

(2)接种前，需对培养基进行灭菌处理。使用高压蒸汽灭菌器，将培养基在121摄氏度下灭菌15分钟。灭菌后的培养基需冷却至约45摄氏度，然后进行接种。在接种过程中，使用无菌接种环取适量上清液，分别接种于麦康凯琼脂和SS琼脂平板上。例如，在一个实验中，我们接种了100个麦康凯琼脂平板和100个SS琼脂平板，每个平板接种10个样品。

(3)接种后，将平板置于37摄氏度恒温培养箱中培养24小时。观察菌落生长情况，记录菌落特征，如颜色、大小、形状等。在一个案例中，我们对分离得到的菌落进行了鉴定，发现其中10个样本在麦康凯琼脂平板上生长出红色菌落，符合大肠杆菌的特征；另外5个样本在SS琼脂平板上生长出无色透明菌落，符合沙门氏菌的特征。

此外，以下是一些注意事项：

(1)在处理和接种过程中，严格遵循无菌操作规程，避免污染。例如，在接种过程中，确保接种环在火焰上灼烧灭菌，避免交叉污染。

(2)接种后的平板需在规定时间内观察结果，以免影响鉴定准确性。例如，在上述案例中，我们于接种后24小时内观察菌落生长情况。

(3)对于分离得到的菌落，需进行进一步的生化试验和血清学鉴定，以确定其具体种类。例如，我们对分离得到的10个大肠杆菌和5个沙门氏菌样本进行了生化试验和血清学鉴定，最终确定了其种类。

通过以上样本处理与接种流程，我们可以有效地从混合感染样本中分离出鸡大肠杆菌和沙门氏菌，为后续的病原鉴定和防治工作提供有力支持。

1.3分离纯化

在分离纯化阶段，目的在于从混合样本中分离出单一的鸡大肠杆菌和沙门氏菌菌株。以下是分离纯化的具体步骤：

(1)在接种后的平板上，根据菌落特征，如颜色、形状、大小等，挑选出疑似的大肠杆菌和沙门氏菌菌落。例如，在麦康凯琼脂平板上，大肠杆菌通常呈现红色或粉红色菌落，而沙门氏菌则呈现无色透明菌落。选取菌落后，使用无菌接种针将单个菌落接种到新的麦康凯琼脂平板和SS琼脂平板上，以确保菌落的纯度。

(2)将接种了单个菌落的平板置于37摄氏度恒温培养箱中培养18至24小时。在此期间，密切观察菌落的生长情况，确保每个菌落都是单独生长，没有合并现象。如果观察到合并生长的菌落，需要重新接种，以确保分离的菌株纯度。例如，在一个实验中，我们共接种了50个疑似菌落，最终得到了30个纯化后的菌株。

(3)经过纯化后的菌株，需要进一步进行微生物鉴定。这包括对菌株进行生化试验，如氧化酶试验、葡萄糖发酵试验等，以及