鸡蛋壳表面一株鼠伤寒沙门氏菌的分离与鉴定.docx

研究报告

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鸡蛋壳表面一株鼠伤寒沙门氏菌的分离与鉴定

一、实验目的

1.1了解鼠伤寒沙门氏菌的基本特性

(1)鼠伤寒沙门氏菌（Salmonellatyphimurium）是一种革兰氏阴性杆菌，属于沙门氏菌属，广泛存在于自然界中，尤其常见于家禽、家畜及野生动物体内。该菌具有高度的致病性，可引起人类和动物的食物中毒、败血症等多种疾病。据世界卫生组织（WHO）统计，每年全球约有2000万例沙门氏菌感染病例，其中约200万人死亡。鼠伤寒沙门氏菌的致病机制与其产生的毒素、侵袭性因子以及细菌表面的脂多糖等密切相关。例如，脂多糖可以激活宿主免疫系统的炎症反应，导致发热、腹泻等症状。

(2)鼠伤寒沙门氏菌的形态学特征表现为短小、直或略弯曲的杆菌，大小约为0.5-1.0微米×2.0-3.0微米。该菌具有周身鞭毛，能在含有胆盐的培养基上形成明显的迁徙生长现象。此外，鼠伤寒沙门氏菌具有典型的菌落特征，在营养琼脂平板上形成圆形、光滑、湿润、边缘整齐的菌落，直径约为2-4毫米。在选择性培养基上，如SS琼脂平板，鼠伤寒沙门氏菌可形成无色、透明、边缘整齐的菌落。值得注意的是，鼠伤寒沙门氏菌的生化反应具有一定的特异性，如氧化酶试验、尿素酶试验、吲哚试验等均为阴性。

(3)鼠伤寒沙门氏菌的致病性与其产生的毒素和侵袭性因子密切相关。其中，肠毒素是导致人类食物中毒的主要原因之一。肠毒素可激活肠道神经末梢，引起腹泻、腹痛等症状。此外，鼠伤寒沙门氏菌的侵袭性因子，如侵袭素、侵袭相关蛋白等，可帮助细菌穿过宿主细胞膜，侵入宿主组织。例如，侵袭素可以与宿主细胞表面的受体结合，促进细菌的吸附和侵入。在实验室条件下，通过动物感染实验可以观察到鼠伤寒沙门氏菌的致病性。例如，将鼠伤寒沙门氏菌接种于小鼠体内，可引起小鼠出现发热、腹泻、死亡等症状。

1.2掌握鸡蛋壳表面鼠伤寒沙门氏菌的分离方法

(1)鸡蛋壳表面鼠伤寒沙门氏菌的分离是食品安全检测中的重要环节。常用的分离方法包括平板划线法、稀释涂布平板法等。平板划线法操作简便，适用于少量样本的初步分离，但灵敏度较低。稀释涂布平板法具有较高的灵敏度，适用于大量样本的分离。例如，在食品加工企业中，对鸡蛋进行沙门氏菌检测时，通常采用稀释涂布平板法，将鸡蛋壳表面的样品进行10^-3至10^-6倍的稀释，然后涂布于SS琼脂平板上，37℃培养24小时，观察菌落生长情况。

(2)在分离鸡蛋壳表面鼠伤寒沙门氏菌时，首先需采集样品。采集过程中应避免交叉污染，使用无菌操作技术。样品采集后，需进行前处理，如清洗、消毒等。清洗过程中，使用无菌水对鸡蛋壳进行冲洗，去除表面的尘埃和杂质。消毒可选用70%乙醇或2%的次氯酸钠溶液，浸泡鸡蛋壳表面约1分钟。前处理后，将样品进行适当稀释，以减少样品中的细菌数量，提高分离的准确性。

(3)分离后的菌落经37℃培养24小时后，根据菌落特征进行初步鉴定。鼠伤寒沙门氏菌在SS琼脂平板上形成无色、透明、边缘整齐的菌落，菌落周围可能出现溶菌圈。若菌落周围溶菌圈直径大于2毫米，则可能为鼠伤寒沙门氏菌。为进一步确认，可进行生化试验，如氧化酶试验、尿素酶试验、吲哚试验等。例如，在2018年某食品企业对鸡蛋进行沙门氏菌检测时，共采集100份鸡蛋样品，经稀释涂布平板法分离后，共获得50个疑似鼠伤寒沙门氏菌菌落，经生化试验鉴定，其中30份样品确认为鼠伤寒沙门氏菌阳性。

1.3熟悉鼠伤寒沙门氏菌的鉴定技术

(1)鼠伤寒沙门氏菌的鉴定技术主要包括传统的生化鉴定方法和分子生物学鉴定方法。传统的生化鉴定方法主要依赖于细菌的代谢产物和生化特性，如氧化酶试验、尿素酶试验、吲哚试验等。这些方法虽然操作简便，但耗时较长，且对技术人员的要求较高。例如，氧化酶试验是检测细菌是否具有氧化酶的能力，鼠伤寒沙门氏菌通常呈阴性反应。尿素酶试验则是检测细菌是否能分解尿素产生氨，鼠伤寒沙门氏菌通常呈阳性反应。吲哚试验则是检测细菌是否能将色氨酸分解为吲哚，鼠伤寒沙门氏菌通常呈阴性反应。

(2)分子生物学鉴定方法，如聚合酶链反应（PCR）和基因测序，具有快速、准确、灵敏度高和特异性强的特点。PCR技术通过扩增细菌特异性的DNA序列，可以快速鉴定细菌种类。例如，针对鼠伤寒沙门氏菌的16SrRNA基因进行PCR扩增，可以快速检测样品中的鼠伤寒沙门氏菌。此外，基因测序技术可以提供更详细的细菌信息，包括菌株的遗传关系、耐药性等。在2019年的一项研究中，研究人员利用全基因组测序技术对分离得到的鼠伤寒沙门氏菌进行了鉴定，结果显示该菌株与已知的标准菌株具有高度的同源性。

(3)除了上述方法，免疫学鉴定也是鼠伤寒沙门氏菌鉴定的常用技术之一。免疫学鉴定基于细菌与抗体之间的特异性结合，包括直接免疫荧光法、酶联免疫吸附测定（ELISA）等。直接