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基于DNA-银纳米簇荧光探针的离子、小分子及细胞免标记检测研究

摘要

基于纳米材料的荧光分析方法由于具有简便、快捷、易操作、灵敏等优点，在化学分析、生物传感、疾病检测、环境监测等方面具有潜在的应用前景。目前，在结合纳米材料设计的荧光分析方法中，大多是采用共价修饰的方式将纳米材料与靶向识别配体交联在一起去实现目标物的分析检测。而共价修饰费时、费力的多步化学实验过程使得荧光纳米分析方法复杂化，且有可能影响靶向识别配体的特异识别能力。近年来，由DNA为模板制备的荧光银纳米簇具有小尺寸、无毒副作用和光稳定性好，尤其是生物相容性好等优点使其成为热点研究的荧光纳米材料之一。同时，在生物化学分析领域中有很多目标分析物与DNA具有特异的相互作用(如，金属离子H92+与DNA的T碱基形成“T-H92+-T”复合结构、Ar可以与DNA的c碱基形成“c-Ar-c”的复合结构、K+和Pb2+等能够诱导富G的DNA序列形成G四聚体结构等)，尤其是随着SELEX技术的飞速发展，越来越多的物质(从小分子、蛋白到细胞、细菌等)都拥有了能与其产生特异识别的核酸适配体aptamer，这在根本上拓展了分析检测目标物的范围，为化学分析研究提供了有力工具。基于此，针对大多数结合纳米材料的荧光分析方法多步化学修饰费时费力的问题，本论文试图开拓一种新型免标记荧光分析方法的设计研究思路，利用DNA对目标物的特异识别能力结合DNA稳定的荧光银纳米簇巧妙设计一条寡聚核苷酸链既能够实现目标物的识别又可以完成荧光银纳米簇的制备、或者通过DNA与目标物之间的相互作用而促使银纳米簇产生荧光信号的变化、或者由目标物促发DNA分子机器产生信号放大的效果而以DNA稳定的荧光银纳米簇作为信号读出等机制发展一系列免标记荧光分析方法用于重金属离子、小分子及细胞等目标分析物的检测研究。

关键词

DNA-银纳米簇；荧光探针；免标记检测；离子；小分子；细胞

一、引言

1.1研究背景

在当今科技飞速发展的时代，分析检测技术在众多领域都发挥着至关重要的作用。从环境监测中对污染物的精准测定，到生物医学领域对疾病标志物的灵敏检测，再到食品安全方面对有害物质的严格把控，分析检测技术的进步不断推动着各个领域的发展与进步。在众多的分析检测方法中，荧光分析方法凭借其独特的优势，如高灵敏度、高选择性、操作简便、响应快速等，逐渐成为研究的热点，并在实际应用中展现出巨大的潜力。

随着纳米技术的蓬勃发展，纳米材料因其独特的物理化学性质，如小尺寸效应、表面效应、量子尺寸效应等，被广泛应用于荧光分析领域，为荧光分析方法的创新与发展注入了新的活力。纳米材料的引入，使得荧光分析方法在灵敏度和选择性方面得到了显著提升，能够实现对痕量物质的有效检测，满足了日益增长的对高灵敏度分析方法的需求。

然而，目前在结合纳米材料设计的荧光分析方法中，普遍存在一个问题，即大多采用共价修饰的方式将纳米材料与靶向识别配体交联在一起，以实现对目标物的分析检测。这种共价修饰过程需要进行多步复杂的化学实验，不仅耗时费力，增加了实验成本和操作难度，而且在修饰过程中可能会对靶向识别配体的特异识别能力产生影响，进而降低整个荧光分析方法的性能和可靠性。因此，开发一种简单、高效、无需共价修饰的荧光分析方法具有重要的现实意义和迫切性。

1.2DNA-银纳米簇的特性与优势

近年来，DNA-银纳米簇作为一种新型的荧光纳米材料，受到了广泛的关注和深入的研究。DNA-银纳米簇是由DNA作为模板，通过化学还原等方法制备得到的银纳米粒子聚集体。与传统的荧光纳米材料相比，DNA-银纳米簇具有诸多独特的特性和优势。

首先，DNA-银纳米簇具有小尺寸的特点。其粒径通常在几纳米到几十纳米之间，这种小尺寸使其具有较高的比表面积和表面活性，能够增强与目标物的相互作用，提高检测的灵敏度。同时，小尺寸也有利于其在生物体系中的扩散和传输，便于在细胞和生物体内进行应用。

其次，DNA-银纳米簇具有良好的光稳定性。在受到光照射时，其荧光强度不易发生衰减，能够在较长时间内保持稳定的荧光信号输出。这一特性使得DNA-银纳米簇在实际应用中，如长时间的细胞成像和实时监测等方面具有明显的优势，能够提供可靠、稳定的检测结果。

此外，DNA-银纳米簇还具有无毒副作用和生物相容性好的突出优点。DNA作为生物体内的遗传物质，本身具有良好的生物相容性，以其为模板制备的银纳米簇继承了这一特性，能够在生物体系中安全存在，不会对生物体产生明显的毒性和不良反应。这使得DNA-银纳米簇在生物医学领域，如疾病诊断、药物输送、细胞成像等方面具有广阔的应用前景。

1.3DNA与目标物的特