高密度二氧化碳对蛋清液中沙门氏菌和大肠杆菌杀菌效果和杀菌动力学的研究.docxVIP

研究报告

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高密度二氧化碳对蛋清液中沙门氏菌和大肠杆菌杀菌效果和杀菌动力学的研究

一、实验材料与方法

1.实验材料

(1)实验材料主要包括沙门氏菌和大肠杆菌的菌种，其中沙门氏菌选用ATCC13076标准菌株，大肠杆菌选用ATCC25922标准菌株。这些菌株均来源于中国典型培养物保藏中心（CCTCC），并经过实验室验证确保其纯度和活性。实验中使用的蛋清液购自市售鸡蛋，新鲜且未经过任何化学处理。实验前，鸡蛋需经过清洗、煮沸和冷却等步骤，以确保蛋清液中不含任何污染物。

(2)实验所需的仪器设备包括二氧化碳培养箱、细菌计数器、生物安全柜、精密天平、无菌操作台、恒温培养箱、高压蒸汽灭菌器、高压均质机、紫外分光光度计、酶标仪、低温冰箱等。二氧化碳培养箱用于提供适宜的二氧化碳浓度环境，以确保细菌能够在实验条件下生长。细菌计数器用于精确计数菌落形成单位（CFU），以评估杀菌效果。生物安全柜和精密天平用于进行无菌操作和精确称量实验材料。无菌操作台则提供了无菌操作的平台。

(3)实验中使用的培养基包括肉汤培养基和LB培养基。肉汤培养基用于沙门氏菌和大肠杆菌的常规培养，其主要成分包括牛肉膏、蛋白胨、氯化钠和水。LB培养基则用于实验中细菌的定量培养，其主要成分包括酵母提取物、蛋白胨、氯化钠、磷酸氢二钾和磷酸二氢钾。这两种培养基均按照标准配方配制，经过高压蒸汽灭菌后使用。此外，实验过程中还需使用到各种试剂，如无菌生理盐水、无菌甘油、无菌磷酸缓冲盐溶液（PBS）、无菌NaOH溶液等，这些试剂均需按照实验要求进行配置和灭菌。

2.实验仪器与设备

(1)实验仪器设备中，二氧化碳培养箱是关键设备之一，其工作温度范围为30-37℃，能够精确控制二氧化碳浓度在5%-10%之间，为细菌的生长提供适宜的环境。该培养箱配备有温度和二氧化碳浓度双重控制系统，确保实验结果的准确性和重复性。

(2)生物安全柜是进行微生物实验时必不可少的设备，其工作等级为II级，能够有效防止细菌等微生物的污染。生物安全柜内部风速均匀，确保实验操作的安全性。此外，生物安全柜还具备紫外线消毒功能，可定期对实验台面进行消毒，减少交叉污染的风险。

(3)实验中使用的精密天平具有高精度和高稳定性，能够精确称量实验材料。该天平的量程为0.1mg-200g，满足实验中对微量物质和大量物质的称量需求。同时，精密天平还具备自动校准功能，确保称量结果的准确性。此外，实验中还使用了高压蒸汽灭菌器、高压均质机等设备，用于培养基和实验材料的灭菌处理，确保实验的无菌性。

3.实验方法与步骤

(1)实验前，首先对实验材料进行预处理。将新鲜鸡蛋清洗后，煮沸5分钟进行消毒，然后冷却至室温。取蛋清液，用无菌生理盐水稀释至10^-6、10^-5、10^-4、10^-3和10^-2五个浓度梯度。每个浓度梯度分别接种100μl的沙门氏菌和大肠杆菌混合菌液，置于37℃的二氧化碳培养箱中培养24小时。培养结束后，用无菌生理盐水洗涤菌落，并进行平板计数，以确定初始菌落数。

(2)接下来进行高密度二氧化碳处理实验。将上述不同浓度的蛋清液分别置于无菌培养皿中，加入高密度二氧化碳气体，使二氧化碳浓度达到10%、15%、20%、25%和30%。在每个浓度下，分别设置三个平行实验组，同时设置一个对照组（未添加二氧化碳）。将培养皿放入二氧化碳培养箱中，在37℃下培养不同时间（0分钟、10分钟、20分钟、30分钟、40分钟、50分钟、60分钟和70分钟），观察并记录细菌生长情况。

(3)为了进一步分析高密度二氧化碳的杀菌动力学，采用一级动力学模型对实验数据进行拟合。首先，以时间为自变量，以对数菌落数为因变量，绘制对数菌落数随时间变化的曲线。然后，对曲线进行非线性拟合，得到一级动力学方程。根据拟合结果，计算半数杀菌浓度（Km）和杀菌速率（Vmax）。此外，为了验证实验结果的可靠性，将实验数据与已有文献报道的杀菌动力学参数进行比较，分析高密度二氧化碳对沙门氏菌和大肠杆菌的杀菌效果。

二、实验设计

1.实验分组

(1)实验分组共分为六组，每组实验重复三次以确保数据的可靠性。第一组为对照组，仅包含蛋清液和细菌，不添加任何处理剂，用于评估蛋清液和细菌自身的生长情况。第二组至第五组分别对应不同浓度的高密度二氧化碳处理组，即10%、15%、20%、25%和30%的二氧化碳浓度。每组实验均使用相同体积的蛋清液和细菌混合液，确保实验条件的一致性。

(2)在第二组至第五组中，每组又细分为三个亚组，分别代表不同处理时间点，即10分钟、30分钟和60分钟。这种分组设计旨在观察不同浓度高密度二氧化碳在不同处理时间下的杀菌效果。例如，对于20%二氧化碳浓度的实验组，分别记录10分钟、30分钟和60分钟时的菌落数，以