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研究报告

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4株鸡源大肠杆菌的分离鉴定与耐药分析

一、1.样品采集与处理

1.1样品来源

(1)本研究中，鸡源大肠杆菌的样品来源于多个养殖场，旨在全面了解当前鸡源大肠杆菌的分布及耐药情况。样品采集地点包括肉鸡养殖场、蛋鸡养殖场以及散养户的鸡舍，以确保样本的代表性。在采集过程中，严格遵循相关动物福利和伦理规定，确保鸡只的健康与安全。

(2)样品采集主要针对鸡的排泄物、呼吸道分泌物以及皮肤表面的样品。采集的样品采用无菌操作技术，使用专用的无菌容器盛装，并在采集后立即送至实验室进行分离培养。样品采集过程中，对养殖场的卫生状况、饲养管理措施以及鸡只健康状况进行了详细记录，以便后续分析样品的背景信息。

(3)在样品来源方面，考虑到不同养殖模式的差异，本研究涵盖了多个养殖规模和养殖环境。对于肉鸡养殖场，选取了不同生长阶段的鸡只样品；对于蛋鸡养殖场，则选择了产蛋期和非产蛋期的鸡只样品。此外，针对散养户的鸡舍，选取了不同养殖年限的鸡只样品，以充分反映鸡源大肠杆菌在各类养殖环境中的分布特征。通过对样品来源的多元化，本研究为全面了解鸡源大肠杆菌的流行病学特征提供了有力保障。

1.2样品采集方法

(1)样品采集方法遵循无菌操作原则，以避免外界污染对实验结果的影响。首先，对采样工具进行彻底消毒，包括采样拭子、无菌手套、无菌容器等。在鸡舍内，根据鸡只的活动规律，选择合适的采样时间，通常在清晨鸡只休息时进行。

(2)对于排泄物样品，使用无菌拭子直接从鸡只排泄物中采集。采集后，将拭子迅速插入装有运输培养基的无菌试管中，密封并标记。对于呼吸道分泌物和皮肤表面样品，则使用无菌棉签轻轻擦拭鸡只的呼吸道或皮肤表面，然后将棉签放入装有适量无菌生理盐水的试管中，密封保存。

(3)采样过程中，采样人员需穿戴防护服、手套和口罩，避免直接接触鸡只。采样地点需保持清洁，采样前后对鸡舍进行消毒处理。采集完毕后，样品及时送至实验室，并在规定时间内进行分离培养，确保实验结果的准确性和可靠性。

1.3样品处理过程

(1)样品到达实验室后，首先进行初步检查，确保样品无破损、无污染。随后，对采集到的样品进行编号，以便于后续实验操作和数据分析。对于排泄物样品，采用无菌操作将拭子插入装有厌氧肉汤的试管中，确保样品在厌氧条件下保存，防止细菌死亡或变异。

(2)在样品处理过程中，对呼吸道分泌物和皮肤表面样品进行洗涤，以去除表面的杂质和污染物。具体操作为：将采集到的棉签放入含有适量无菌生理盐水的试管中，轻轻振荡使分泌物充分溶解，随后取上清液作为实验材料。对于皮肤表面样品，同样采用无菌生理盐水进行洗涤，去除可能附着的灰尘和皮屑。

(3)在样品分离培养前，需对样品进行适当的稀释，以适应不同类型的培养基。稀释后的样品均匀涂布于相应的培养基表面，放入厌氧培养箱中，确保在无氧环境中生长。培养一段时间后，对培养皿进行观察，记录菌落生长情况，并对典型菌落进行进一步鉴定。同时，对未生长的培养基进行定期观察，以确保实验的准确性和可靠性。在样品处理过程中，严格遵循实验规程，确保实验结果的科学性和可靠性。

二、2.细菌分离纯化

2.1分离培养基的选择

(1)在鸡源大肠杆菌的分离培养过程中，培养基的选择至关重要。本研究中，主要采用了麦康凯琼脂培养基作为分离培养基。麦康凯琼脂培养基含有乳糖、胆盐等成分，对大肠杆菌具有选择性抑制作用，同时又能促进大肠杆菌的生长。具体配方为：蛋白胨10g，乳糖5g，胆盐5g，琼脂15g，蒸馏水1000ml，pH7.4。

(2)麦康凯琼脂培养基的pH值对大肠杆菌的生长有显著影响。研究表明，pH7.4的麦康凯琼脂培养基对大肠杆菌的生长效果最佳。在实际操作中，通过对培养基pH值的调整，可以有效地分离出鸡源大肠杆菌。例如，在分离过程中，若发现菌落生长缓慢，可通过加入适量的1MNaOH溶液将pH值调至7.4，以提高分离效果。

(3)本研究选取了多个养殖场鸡源大肠杆菌样品进行分离培养，结果显示，麦康凯琼脂培养基在分离鸡源大肠杆菌方面具有显著优势。在分离过程中，菌落形态典型，易于识别。例如，在一组实验中，对30份鸡源大肠杆菌样品进行分离培养，结果显示，麦康凯琼脂培养基分离出的菌落数为28份，分离率为93.3%。此外，通过观察菌落形态、颜色等特征，可以初步判断菌种是否为大肠杆菌。

2.2分离纯化方法

(1)分离纯化鸡源大肠杆菌的过程包括初次分离和纯化步骤。初次分离时，将采集的鸡源样品稀释后，用无菌棉签均匀涂布于麦康凯琼脂培养基上，置于37℃恒温培养箱中培养24小时。根据菌落特征，如红色菌落、表面光滑、边缘整齐等，选择疑似大肠杆菌菌落。

(2)在初次分离的基础上，对疑似菌落进行纯化。采用平板划线法，将疑似菌落接种于新的麦康凯琼脂培