基于核酸靶标等温扩增快速技术在检测食源性病原菌中的应用.docxVIP

研究报告

PAGE

1-

基于核酸靶标等温扩增快速技术在检测食源性病原菌中的应用

一、引言

1.1食源性病原菌的危害与检测需求

食源性病原菌是引发食源性疾病的主要病原体，对人类健康和公共安全构成了严重威胁。病原菌包括沙门氏菌、大肠杆菌、弯曲菌和金黄色葡萄球菌等，它们可以通过污染的食物和饮料进入人体，引起一系列急性或慢性疾病。例如，沙门氏菌感染可能导致发热、腹泻、头痛等症状，严重时甚至可能引起败血症和死亡；大肠杆菌O157:H7感染则可能导致严重的肠道出血和溶血性尿毒症。由于食源性病原菌的广泛存在和传播途径的多样性，全球范围内食源性疾病的发生率和死亡率持续上升，给公共卫生体系带来了巨大压力。

食源性病原菌的检测需求源于对食品安全和公众健康的关注。随着全球化食品供应链的扩展，食物来源的地域界限日益模糊，病原菌的传播风险也随之增加。为了保障食品安全，及时、准确地检测食源性病原菌至关重要。检测需求主要体现在以下几个方面：首先，对于食品生产、加工和销售环节，需要通过检测来确保食品在流通过程中的安全性；其次，在疾病爆发时，快速、高效的检测方法有助于快速追踪病原源，防止疫情蔓延；最后，在食品安全风险评估中，检测数据是制定相关政策和措施的重要依据。

为了满足食源性病原菌的检测需求，科学家们开发了多种检测技术，包括传统培养方法、免疫学检测、分子生物学技术等。然而，这些方法在灵敏度、特异性和检测速度方面仍存在一定的局限性。例如，传统培养方法耗时较长，无法满足快速检测的需求；免疫学检测对病原菌的检测灵敏度较低，且易受交叉反应的影响。因此，开发快速、高灵敏度、高特异性的检测技术对于保障食品安全具有重要意义。基于核酸靶标等温扩增技术的快速检测方法因其独特的优势，成为近年来食品安全领域的研究热点。

1.2核酸靶标等温扩增技术的原理

(1)核酸靶标等温扩增技术（isothermalamplification，IA）是一种在恒定温度下进行的核酸扩增方法，无需传统PCR中的热循环步骤。该技术利用特定的核酸扩增酶，如DNA聚合酶、RNA聚合酶或RNA结合蛋白，直接在等温条件下进行DNA或RNA的复制。这一特性使得IA技术在设备要求、操作简便性和成本效益方面具有显著优势。

(2)IA技术的基本原理是利用核酸序列的互补性，通过设计特定的引物和探针，在等温条件下实现靶标核酸的指数级扩增。例如，环介导等温扩增（loop-mediatedisothermalamplification，LAMP）技术利用LAMP引物设计原理，通过环状DNA中间体的形成和扩增，实现靶标DNA的快速扩增。此外，其他IA技术如重组聚合酶扩增（recombinasepolymeraseamplification，RPA）和滚环扩增（rollingcircleamplification，RCA）等，也基于类似的原理，通过不同的机制实现核酸的扩增。

(3)IA技术具有多种优势，包括操作简便、快速、低成本、对仪器设备要求低等。这些特点使得IA技术在病原体检测、遗传疾病诊断、环境监测等领域具有广泛的应用前景。此外，IA技术还可以与其他技术相结合，如微流控芯片、微阵列等，进一步提高检测的灵敏度和特异性，为疾病预防和控制提供有力支持。随着技术的不断发展和完善，IA技术在核酸检测领域的应用将更加广泛和深入。

1.3等温扩增技术在病原菌检测中的应用现状

(1)等温扩增技术在病原菌检测中的应用现状表明，该技术在病原体快速检测领域取得了显著进展。随着技术的不断发展和完善，等温扩增技术已经广泛应用于食源性病原菌、呼吸道病原菌、血液病原菌等多种病原体的检测。其中，环介导等温扩增（LAMP）技术因其操作简便、快速、低成本等优势，在病原菌检测中得到了广泛应用。

在食源性病原菌检测方面，LAMP技术已被成功应用于沙门氏菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等常见食源性病原菌的检测。通过LAMP技术，可以在短时间内对样本进行检测，有效缩短了检测周期，为食品安全提供了有力保障。此外，LAMP技术还可用于其他领域，如动物源性疾病、水环境监测等，对公共卫生安全具有重要意义。

(2)在呼吸道病原菌检测方面，等温扩增技术同样显示出其独特的优势。例如，针对流感病毒、新型冠状病毒（SARS-CoV-2）等呼吸道病原菌的检测，LAMP技术能够实现快速、高灵敏度的检测结果。尤其是在COVID-19疫情期间，LAMP技术在病毒检测中的应用，为疫情防控提供了有力支持。此外，等温扩增技术还可用于结核分枝杆菌、肺炎克雷伯菌等呼吸道病原菌的检测，有助于疾病的早期诊断和及时治疗。

血液病原菌检测是等温扩增技术应用的另一个重要领域。例如，针对乙型肝炎病毒（HBV）、丙型肝炎病毒（HCV）、人类免疫缺陷病毒（HIV）等血液病原