基于多技术联合在食品中志贺氏菌的检测能力验证结果分析及质量控制.docxVIP

PAGE

1-

基于多技术联合在食品中志贺氏菌的检测能力验证结果分析及质量控制

一、1.技术与方法

1.1志贺氏菌检测技术概述

(1)志贺氏菌作为一种常见的食源性病原菌，其检测对于食品安全具有重要意义。传统的志贺氏菌检测方法主要包括显微镜观察、生化鉴定和免疫学检测等。显微镜观察是早期检测志贺氏菌的主要手段，通过观察菌体的形态特征来鉴定菌种，但其灵敏度较低，易受人为因素影响。生化鉴定则是通过一系列生化反应来区分不同菌种，但操作繁琐，耗时较长。随着分子生物学技术的发展，PCR（聚合酶链反应）技术逐渐成为检测志贺氏菌的主要手段，具有快速、灵敏、特异等优点。

(2)PCR技术检测志贺氏菌的原理是利用特异性引物扩增靶标DNA序列，通过检测扩增产物来判断是否存在志贺氏菌。该方法检测限可达到10^2CFU/g（菌落形成单位/克），远高于传统方法的10^5CFU/g。在实际应用中，PCR技术已成功应用于食品、水、环境样品中的志贺氏菌检测。例如，2018年美国食品药品监督管理局（FDA）发布的报告中提到，利用PCR技术检测出的食品中志贺氏菌的阳性率为5.2%，其中大部分为O157:H7型志贺氏菌。

(3)除了PCR技术，近年来，基于多重PCR、实时荧光定量PCR等技术的联合检测方法也得到了广泛应用。多重PCR技术可以在一个反应体系中同时检测多种病原菌，提高了检测效率。实时荧光定量PCR技术则可以实时监测PCR反应进程，实现定量检测，为食品安全风险评估提供有力支持。例如，某研究团队采用多重荧光定量PCR技术检测了某地区食品中的志贺氏菌，检测限达到10^1CFU/g，与传统PCR技术相比，检测时间缩短了约一半。

1.2联合检测技术的原理

(1)联合检测技术是将两种或两种以上的检测方法结合使用，以提高检测的准确性和效率。其原理在于，通过互补不同检测技术的优势和局限性，实现更全面、更可靠的检测结果。例如，在食品中志贺氏菌的检测中，将PCR技术与免疫学检测相结合，可以同时实现快速、灵敏的DNA检测和特异、简便的抗原检测。这种联合检测方法不仅提高了检测的灵敏度，还减少了假阴性和假阳性的发生。

(2)在联合检测技术中，多种检测方法可以相互验证，从而降低单个检测方法的误差。例如，利用PCR技术检测DNA，再通过免疫学方法检测抗原，可以有效地排除由于DNA降解或PCR反应失败导致的假阴性结果。这种双重检测策略在食品安全检测中尤为重要，因为它可以确保即使在DNA检测失败的情况下，也能通过抗原检测识别出病原体。

(3)联合检测技术还可以通过优化实验流程来提高检测效率。例如，在多重PCR技术中，可以在一个反应体系中同时检测多种病原体，从而减少了样品处理时间和反应次数。此外，通过优化引物设计和反应条件，可以进一步提高检测的特异性和灵敏度。在实际应用中，联合检测技术已被广泛应用于病原微生物、药物残留、重金属污染等多种食品安全检测领域，显著提升了食品安全监控水平。

1.3所用到的具体检测方法

(1)在食品中志贺氏菌的检测中，首先采用的标准方法是传统的显微镜观察法。该方法通过对疑似样品进行染色和显微镜观察，直接识别志贺氏菌的形态特征。随后，通过生化试验进一步鉴定菌种，包括对革兰氏染色、氧化酶试验、动力试验、葡萄糖发酵等指标的分析。

(2)为了提高检测的灵敏度和特异性，常采用PCR技术作为辅助手段。在PCR检测中，使用针对志贺氏菌特异基因序列的引物，通过体外扩增靶标DNA片段，随后通过凝胶电泳或实时荧光定量PCR技术进行检测。该方法能够在数小时内快速检测出极低浓度的志贺氏菌，检测限可达到10^2CFU/g。

(3)联合检测技术则是结合了PCR和免疫学方法。在PCR检测的基础上，采用免疫层析或酶联免疫吸附试验（ELISA）来检测志贺氏菌的抗原。这种方法不仅可以验证PCR的结果，还可以提供对志贺氏菌存在状态的快速定性分析。在实际操作中，通过优化实验条件，如优化试剂和缓冲液配方，确保检测结果的准确性和可靠性。

二、2.实验材料与设备

2.1样品来源及预处理

(1)在食品中志贺氏菌的检测中，样品的来源至关重要。样品可能来自各种食品类型，包括肉类、乳制品、水果、蔬菜、水产品等。为了确保检测的准确性和代表性，样品通常从不同批次、不同生产日期和不同销售地点收集。例如，在一次针对鸡肉产品的检测中，研究人员从10个不同农场收集了共计50个样品，涵盖不同的养殖环境和管理条件。

(2)样品收集后，需要进行预处理以确保检测的准确性。预处理步骤可能包括样品的均质化、稀释和储存。均质化是通过对样品进行机械搅拌或研磨，以打破食物颗粒的结构，释放其中的微生物。例如，对于含有较多纤维的蔬菜样品，可能需要使用均质器进行高速搅拌，以确保微生物均匀分布。稀释